培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現用現配,。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

人腦動脈血管維持血管內外的動態(tài)平衡，合成和分泌細胞因子和介質,，維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡,。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腦動脈血管組織中高質量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈,，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行,。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應,。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人腦動脈血管組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質組學,；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產品,，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行,，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產品的質量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐),。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測,，進口來源,，保證5代以內，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài)、結構,、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學的條件,，可以根據實際需要進行人為的控制,，同時，可以施加化學,、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備,。
以下是公司正在銷售的相關產品： 

4.69pg/mlLevonorgestrel；左炔諾孕降鈣素檢測試盒

9.375pg/mlSimvastatin,；辛伐他汀/辛伐他性胎兒蛋白檢測試盒

0.094ng/mlForsythoside A,；連翹酯苷A性酶檢測試盒

1.875ng/mlDiammonium Glycyrrhizate；甘草二銨鹽性亮氨拉鏈轉錄因子ATF樣蛋白檢測試盒

18.75pg/mlClove oil,；香油性成纖維細胞生長因子檢測試盒

0.188ng/ml4,4′-Isopropylidenediphenol,；4,4′-亞基聯苯酚/雙酚A間皮素檢測試盒

9.375pg/mlHelicid；豆腐果苷間變性淋巴瘤激酶檢測試盒

1.875mIU/mlRoxithromycin,；羅紅間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈H1檢測試盒

37.5pg/mlSulfachloropyridazine,；磺胺氯噠嗪間-alpha-胰蛋白酶抑制重鏈H4檢測試盒

14.063pg/mlNotoginsenoside R1；三七皂苷R1假定蛋白LOC677168 ELISA試盒
人腦動脈血管組織提取物人含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5(FNDC5)檢測試盒脫葉靈,噻苯隆

人激肽原1(KNG1)酶聯免疫吸附測定試盒 碘(AR)

人S100鈣結合蛋白A2(S100A2)酶聯免疫吸附測定試盒醇脫酶

人游離睪(F-TESTO)酶聯免疫吸附測定試盒 吐溫80(化學純)

人游離狀腺素(fT4)酶聯免疫吸附測定試盒 吐溫80(藥用級)

人管粘附蛋白1(VAP-1)酶聯免疫吸附測定試盒吐溫80(細胞培養(yǎng)級)

人游離三碘狀腺原氨(fT3)酶聯免疫吸附測定試盒 亞鐵化鉀(AR)

人游離紅蛋白(f-Hb)酶聯免疫吸附測定試盒  葡萄糖鉀(AR)

人非受體型蛋白酪氨酶6(PTPN6)酶聯免疫吸附測定試盒  PF-562271

人O-6-基鳥嘌呤DNA基轉移酶(MGMT)酶聯免疫吸附測定試盒海藻鈉

人原鈣黏素1(PCDH1)酶聯免疫吸附測定試盒 鈉

人原鈣黏素β2(PCDHβ2)酶聯免疫吸附測定試盒 膠原酶I型(sigma)

人原纖蛋白1(FBN1)酶聯免疫吸附測定試盒膠原酶II型(sigma)

人原纖蛋白2(FBN2)酶聯免疫吸附測定試盒膠原酶IV型(sigma)

人原纖蛋白3(FBN3)酶聯免疫吸附測定試盒鉬鈉二水(AR)