詳細(xì)介紹
細(xì)胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,,干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,,很難說是細(xì)胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好,;另外溫度對細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細(xì)胞儲存的方式,,快遞時間也很難控制,,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,,排除復(fù)蘇造成影響,,常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,,只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐),。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等,購買到貨后,,由我們實(shí)驗室擴(kuò)增,、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,,進(jìn)口來源,,保證5代以內(nèi),活力>95%,,無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。
尿道是從膀胱通向體外的管道,。男性尿道細(xì)長,長約18cm,,起自膀胱的尿道內(nèi)口,,上于尿道外口,行程中通過前列腺部,、膜部和陰莖海綿體部,,男性尿道兼有排尿和排精功能,。女性尿道粗而短,長約5cm,,起于尿道內(nèi)口,,經(jīng)陰道前方,開口于陰道前庭,。公司科技提供來自新鮮或冷凍人尿道組織中高質(zhì)量的總RNA,,PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分,。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院,,采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人尿道組織裂解液,離心去除組織碎片,,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存,。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,;<3>基因克隆與目標(biāo)測序,;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Human Ureter: Normal Lliac Artery Derivatives |
貨號 | CS-X3842 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu),、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,,同時,可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),,85%,;北美胎牛血清(United States,GIBCO,,貨號16000-044),,15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
0.188ng/mlXylotriose;木三糖尿嘧啶核苷化酶1檢測試盒
0.094ng/mlLycorine,;石蒜尿激酶型纖溶酶原激活物受體檢測試盒
0.094ng/mlChelidonine,;白屈菜尿激酶型纖溶酶原激活物檢測試盒
0.094ng/mlEllagic acid;鞣花尿激酶檢測試盒
0.094ng/mlMangiferin,;芒果苷尿苷二葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶檢測試盒
46.875pg/mlDehydrocostus Lactone,;去木香內(nèi)酯尿苷二葡萄糖醛轉(zhuǎn)移酶2檢測試盒
18.75pg/mlBergenin;巖白菜素尿苷二葡萄糖醛轉(zhuǎn)移酶1檢測試盒
4.688pg/mlNobiletin,;川陳皮素鳥苷結(jié)合蛋白4檢測試盒
0.188ng/mlRhein,;大黃鳥苷交換因子檢測試盒
0.375ng/mlIndirubin;靛玉紅鳥氨脫羧酶檢測試盒
人尿道組織提取物花生四烯-12-脂加氧酶(ALOX12)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)阿洛西林鈉
抑制蛋白β1(ARRβ1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二氟氯
抑制蛋白β2(ARRβ2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)格爾德;格爾德美素
防御素β1(DEFβ1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)巴佛洛A1
胎球蛋白B(FETUB)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二氟氯酯
載脂蛋白C2(APOC2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1,1,1-三氟-2-
載脂蛋白A5(APOA5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)昔羅鈉
KSP鈣黏蛋白(CDH16)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)氨來呫諾,;氨來諾
觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)松蘿,;D-地衣(標(biāo)準(zhǔn)品)
肌微管鈣黏附蛋白(CDH15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)松蘿;D-地衣
肝腸鈣黏蛋白(CDH17)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)茴香
白介素12B(IL12B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二氟氯鈉
白介素35(IL35)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)甘氨鵝脫氧膽鈉
白介素35(IL35)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BGJ398(NVP-BGJ398)
嗜鉻蛋白A(CHGA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BMN-673