人腎系膜組織提取物現(xiàn)貨供應(yīng),，質(zhì)量有保證,、*,、實(shí)驗(yàn)效果好,，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),，同時(shí)提供價(jià)格,、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格,、用途,、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控,、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實(shí)際進(jìn)行人為的控制，同時(shí),，可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時(shí),，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察,、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影,、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué),、免疫學(xué),、腫瘤學(xué)、生物化學(xué),、遺傳學(xué),、分子生物學(xué)等； 適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物,，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織,，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)可提供大量,、同一時(shí)期,、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,。

人腎系膜組織主要功能有：(1)組成過(guò)濾屏障內(nèi)壁的重要部分,。(2)在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子。(3)受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞,，進(jìn)而影響腎臟病變,。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人腎系膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,，蛋白質(zhì)及其亞組分,。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人腎系膜組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

產(chǎn)品名稱	人腎系膜組織提取物
英文名稱	Human Kidney : Normal Glomerular Mesangial Derivatives
貨號(hào)	CS-X3844

 

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號(hào)16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

46.875pg/ml5-Hydroxy-1,4-naphthalenedione,；胡桃醌 鈉離子通道蛋白抗體ELISA試盒

9.375pg/ml5-Hydroxy-2-Methyl-1,4-Naphthoquinone；白花丹醌/蘭雪醌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29檢測(cè)試盒

0.188ng/mlCepharanthine,；千金藤素內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素檢測(cè)試盒

0.094ng/mlTangeretin,；桔皮素內(nèi)臟脂肪特性絲氨蛋白酶抑制檢測(cè)試盒

18.75pg/mlAloeemodin；蘆薈大黃素內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素檢測(cè)試盒

0.094ng/mlChrysophanol,；大黃酚內(nèi)源性分泌型糖基化終產(chǎn)物受體檢測(cè)試盒

0.094ng/mlHyperoside,；金絲桃苷內(nèi)皮脂肪酶檢測(cè)試盒

46.875pg/mlKaempferitrin；苷內(nèi)皮抑素檢測(cè)試盒

18.75pg/mlImperatorin,；歐前胡素內(nèi)皮型一氧化合成酶檢測(cè)試盒

0.188ng/mlIsoimperatorin,；歐前胡素內(nèi)皮細(xì)胞特分子-1檢測(cè)試盒
人腎系膜組織提取物反三碘狀腺原氨(rT3)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)阿格列汀;阿洛利停

粘蛋白5AC(MUC5AC)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)莪術(shù)烯醇(標(biāo)準(zhǔn)品)

凝因子Ⅷ(F8)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BYL719

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BYL719

蛋白激酶Cζ(PKCζ)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)A66,p110α抑制

蛋白酪氨酶受體O(PTPRO)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)SC-514;IKK-2抑制

線粒體醛脫酶(ALDM)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)4-庚

性酶1(ACP1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)γ-環(huán)糊精

性酶1(ACP1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)基倍他環(huán)糊精,2,6-二基-β-環(huán)糊精

角蛋白8(KRT8)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)埃博B；帕土匹龍

生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BMS-345541

白介素8(IL8)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)IKK-16,選擇性IKK抑制

生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)曲格列汀琥珀鹽

生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)2-[2-(2-t-Boc-氨基氧基)氧基]醇

金屬蛋白3(MT3)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)2,8-二基-2,3,4,4a,5,9b-六-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚二鹽鹽

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出,，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式,，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過(guò)后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購(gòu)買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),，進(jìn)口來(lái)源，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無(wú)細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。