細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài)、結構,、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學的條件,，可以根據(jù)實際進行人為的控制,，同時，可以施加化學,、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備  記錄方式可采用攝影照片,、縮時電影、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應用的學科領域較為寬廣,，如細胞學、免疫學,、腫瘤學,、生物化學、遺傳學,、分子生物學等,； 適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物,，一種動物的不同年齡階段以及不同組織,，都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量,、同一時期,、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象,。

人腎系膜組織主要功能有：(1)組成過濾屏障內壁的重要部分,。(2)在炎癥和致血栓物質的刺激合成必要的生物活性分子。(3)受損后影響系膜細胞和上皮細胞,，進而影響腎臟病變,。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腎系膜組織中高質量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈,，蛋白質及其亞組分,。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應體系進行逆轉錄,，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人腎系膜組織裂解液，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學,；<6>芯片研究與表達圖譜,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。
?以下是公司正在銷售的相關產(chǎn)品： 

46.875pg/ml5-Hydroxy-1,4-naphthalenedione,；胡桃醌 鈉離子通道蛋白抗體ELISA試盒

9.375pg/ml5-Hydroxy-2-Methyl-1,4-Naphthoquinone；白花丹醌/蘭雪醌內質網(wǎng)蛋白29檢測試盒

0.188ng/mlCepharanthine,；千金藤素內脂素/內臟脂肪素檢測試盒

0.094ng/mlTangeretin,；桔皮素內臟脂肪特性絲氨蛋白酶抑制檢測試盒

18.75pg/mlAloeemodin；蘆薈大黃素內源性糖皮質激素檢測試盒

0.094ng/mlChrysophanol,；大黃酚內源性分泌型糖基化終產(chǎn)物受體檢測試盒

0.094ng/mlHyperoside,；金絲桃苷內皮脂肪酶檢測試盒

46.875pg/mlKaempferitrin；苷內皮抑素檢測試盒

18.75pg/mlImperatorin；歐前胡素內皮型一氧化合成酶檢測試盒

0.188ng/mlIsoimperatorin,；歐前胡素內皮細胞特分子-1檢測試盒
人腎系膜組織提取物反三碘狀腺原氨(rT3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)阿格列汀;阿洛利停

粘蛋白5AC(MUC5AC)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)莪術烯醇(標準品)

凝因子Ⅷ(F8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BYL719

葡萄糖轉運蛋白4(GLUT4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BYL719

蛋白激酶Cζ(PKCζ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)A66,p110α抑制

蛋白酪氨酶受體O(PTPRO)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)SC-514;IKK-2抑制

線粒體醛脫酶(ALDM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)4-庚

性酶1(ACP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)γ-環(huán)糊精

性酶1(ACP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)基倍他環(huán)糊精,2,6-二基-β-環(huán)糊精

角蛋白8(KRT8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)埃博B,；帕土匹龍

生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BMS-345541

白介素8(IL8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)IKK-16,選擇性IKK抑制

生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)曲格列汀琥珀鹽

生長分化因子15(GDF15)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2-[2-(2-t-Boc-氨基氧基)氧基]醇

金屬蛋白3(MT3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,8-二基-2,3,4,4a,5,9b-六-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚二鹽鹽

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種，也較少使用這種方式,，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行,，還是復蘇沒操作好,；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐),。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源,，保證5代以內，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。