細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際進(jìn)行人為的控制,，同時,，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時,，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué)、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片,、縮時電影、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué),、腫瘤學(xué),、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等,； 適用的對象范圍廣,，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織,，都可進(jìn)行有針對性的研究,。
6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時期,、重復(fù)性好的,、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。

結(jié)腸圍繞在小腸周圍,，始于盲腸終于直腸,，分為升結(jié)腸、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸四部分,。公司科技提供來自新鮮或冷凍人結(jié)腸組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,，蛋白質(zhì)及其亞組分,。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人結(jié)腸組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

18.75pg/mlScutellarin,；野黃芩苷神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白檢測試盒

0.375ng/mlGeniposidic acid；京尼平苷神經(jīng)激肽B檢測試盒

9.375pg/mlFood Yellow 3,；食品黃3/日落黃神經(jīng)調(diào)節(jié)素1亞型HRGβ1檢測試盒

9.375pg/mlIsosteviol,；甜菊醇神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4檢測試盒

23.438pg/mlPicroside I；胡黃連苷I神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3檢測試盒

0.094ng/mlGambogic acid,；藤黃神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2檢測試盒

0.188ng/mlCyanidin-3-O-Galactoside,；矢車菊素-3-O-半乳糖苷神經(jīng)穿透素1檢測試盒

0.469ng/ml Sorafenib tosylate；索拉非尼上皮中性粒細(xì)胞活化肽78檢測試盒

0.469ng/ml Euphobiasteroid,；千金子甾醇上皮細(xì)胞粘附分子檢測試盒

9.375pg/mlFraxinellone,；梣上皮特性抗原檢測試盒
人結(jié)腸組織提取物肌紅蛋白(MYO)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)當(dāng)藥醇苷(標(biāo)準(zhǔn)品)

白介素8(IL8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)皂素(進(jìn)分)

白介素1β(IL1β)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苦豆

白介素1β(IL1β)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)松柏醇

白介素1β(IL1β)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酰輔酶A鈉鹽

白介素17(IL17)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)甘氨膽

白介素17(IL17)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)甘氨膽(標(biāo)準(zhǔn)品)

白介素1δ(FIL1δ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)肌苷二鈉

白介素1δ(FIL1δ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)環(huán)索奈德

白介素1δ(FIL1δ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)環(huán)索奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)

S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)羅漢松脂素,羅漢松脂酚

S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酪氨酰氨

S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)皂素；茶皂素

S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)炔諾(標(biāo)準(zhǔn)品)

S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)炔諾

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出,，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說是細(xì)胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細(xì)胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進(jìn)口來源,，保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。