培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。

直腸并不直,，在矢狀面上有骶曲和會陰曲兩個彎曲，骶曲是直腸上段在骶,、尾骨前面下降,，形成凸向后的彎曲；會陰曲是直腸尾端繞過尾骨尖,，形成凸向前的彎曲,。公司科技提供來自新鮮或冷凍人直腸組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈,，蛋白質(zhì)及其亞組分,。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應體系進行逆轉錄,，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應,。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人直腸組織裂解液，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學,；<6>芯片研究與表達圖譜,。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種，也較少使用這種方式,，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行,，還是復蘇沒操作好,；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復蘇好細胞,，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源,，保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài)、結構,、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件,，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時,，可以施加化學,、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細胞術、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學,、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備,。
以下是公司正在銷售的相關產(chǎn)品： 

18.75pg/mlApigenin-7-O-glucronide,；芹菜素-7-O-葡萄糖醛苷色素上皮衍生因子檢測試盒

0.188ng/mlAstilbin；落新婦苷色氨酰tRNA合成酶檢測試盒

9.375pg/mlCarbamazepine,；卡馬西平色氨羥化酶檢測試盒

1.875pg/ml8-Methoxypsoralen,；花椒素三角形四肽重復蛋白1檢測試盒

9.375pg/mlAmygdalin；苦杏仁苷三官能酶亞基β,線粒體檢測試盒

9.375pg/mlDi-tert-octyl-Disulfide,；氯化天竺葵素三碘狀腺原氨檢測試盒

0.938pg/mlArecoline hydrobromide,；檳榔腮腺炎病IgM ELISA試盒

9.375pg/mlMethyl linolenate；亞麻酯腮腺炎病IgG ELISA試盒

9.375pg/mlPotassium 7-hydroxynaphthalene-1-sulfonate,；2-萘酚-8-磺鉀/藏紅花(含構體)軟骨糖蛋白39檢測試盒

0.094ng/mlRosiglitazone hydrochloride,；鹽羅格列軟骨寡聚蛋白檢測試盒
人直腸組織提取物載脂蛋白A2(APOA2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)馬來阿森那平

載脂蛋白A2(APOA2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)三苯基坎地沙坦西來替昔酯

P選擇素(SELP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)他莫昔芬

層粘連蛋白α1(LAMα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)頭孢替安鹽鹽

層粘連蛋白α1(LAMα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)頭孢替安鹽鹽(標準品)

層粘連蛋白α1(LAMα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鹽毛果蕓香,匹魯卡品鹽鹽

脂酶A2激活蛋白(PLAA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鹽毛果蕓香(標準品)

性鞘脂二酯酶(Alk-Smase)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)絡塞定（標準品）

性鞘脂二酯酶(Alk-Smase)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)雷公藤內(nèi)酯（標準品）

性鞘脂二酯酶(Alk-Smase)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)連翹酯苷E(標準品)

膽囊收縮素(CCK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)羅通定/左旋延胡索素/左旋四巴馬汀(標準品）

膽囊收縮素(CCK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)表沒食子兒茶素沒食子酯（標準品）

膽囊收縮素(CCK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)去氧膽（標準品）

胰高糖素樣肽1(GLP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鈣黃綠素酰酯

胰高糖素樣肽1(GLP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)煙酰胺（標準品）