培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

大鼠小腦顆粒細胞提取物是從大鼠原代小腦顆粒細胞提取的,，大鼠原代小腦顆粒細胞從正常大鼠腦組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應,。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠小腦顆粒組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜,。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行,，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細菌、真菌,、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件,，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時,，可以施加化學,、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.094ng/ml4-Ethylphenol,；4-基苯酚/對基苯酚人和肽素(CPP)Polyclonal Antibody

1.875ng/mlp-Hydroxybenzaldehyde,；對羥基苯醛 人膜聯(lián)蛋白-A3 Polyclonal Antibody

0.094ng/mlMethyl myristate；豆蔻酯人膜聯(lián)蛋白A1( Annexin A1)Polyclonal Antibody

4.69pg/mlAcetate gossypol,； 醋棉酚人載脂蛋白H(APOH)Polyclonal Antibody

46.9pg/mlUsnic acid,；松蘿人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)Polyclonal Antibody

0.938ng/ml(−)-Epicatechin gallate/ECG；表兒茶素沒食子酯人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)Polyclonal Antibody

9.375pg/mlPristimerin,；扁塑藤素人載脂蛋白C1(APO-C1)Polyclonal Antibody

0.094ng/mlGriseofulvin,；灰黃人Atonal蛋白的同源蛋白1(ATOH1)ELISA 試盒

0.375ng/mlSarsasapogenin；菝葜皂苷元人芳基酯酶A(ASA)Polyclonal Antibody

0.094ng/mlPyruvic acid,；人酰輔酶A酰轉(zhuǎn)移酶1(ACAT1)Polyclonal Antibody
大鼠小腦顆粒細胞提取物Ⅲ型膠原(COL3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)考馬斯亮藍R250

白介素10(IL10)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)考馬斯亮藍G250

白介素18(IL18)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酚藍

白介素1β(IL1β)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)固藍B

白介素2(IL2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)氯化硝基四唑藍

白介素4(IL4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯胺藍O

白介素6(IL6)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)阿利新藍8GX

白介素8(IL8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)四唑藍,；BT

表皮生長因子(EGF)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)噻唑藍;MTT

促生長激素釋放激素(GHRH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯胺藍(水溶)

干擾素γ(IFNγ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)亮藍

內(nèi)皮素1(EDN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)索非那新琥珀鹽

腦鈉素(BNP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)結(jié)晶紫

生長激素(GH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)結(jié)晶紫(進口)