細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學,、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片,、縮時電影,、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學科領(lǐng)域較為寬廣,，如細胞學,、免疫學、腫瘤學、生物化學,、遺傳學,、分子生物學等； 適用的對象范圍廣,，從低等動物到高等動物,，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究,。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量,、同一時期、重復(fù)性好的,、生物學性狀相似的實驗對象,。

大鼠角膜成纖維細胞提取物是從大鼠原代角膜成纖維細胞提取的，大鼠原代角膜成纖維細胞從正常大鼠眼組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠角膜成纖維組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學,；<6>芯片研究與表達圖譜。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.375ng/mlHydroxytyrosol,；羥基酪醇人AP-2復(fù)合物亞基β(AP2B1)ELISA試盒

0.094ng/mlPalmatine hydrochloride,；鹽巴馬汀/鹽掌葉防己人天門冬氨酰/天冬酰胺酰β羥化酶(Aspartyl/asparaginyl beta-hydroxylase)ELISA試盒

37.5pg/mlNomilin；諾米林人腺苷受體A1(Adenosine receptor A1)ELISA試盒

0.094ng/ml(±)-α-Tocopherol,；DL-α-生育酚人腺苷受體A2a(Adenosine receptor A2a)ELISA試盒

0.188ng/mlAdapalene,；阿達帕林人線粒體琥珀鹽半醛脫酶(SSADH)ELISA試盒

0.188ng/mlSodium 2-propylpentanoate；戊鈉人醛脫酶家族16成員A1(ALDH16A1)ELISA試盒

0.188ng/mlEpigoitrin,；表告依春人氨肽酶Q(AP-Q)ELISA試盒

18.75 pg/mlDemethylzeylasteral,；去澤拉木醛人腺瘤性結(jié)腸息病蛋白(Protein APC)ELISA試盒

9.375pg/mlTaurine,；?；侨巳┻€原酶1-B10(Aldo-keto reductase family 1 member B10)ELISA試盒

0.188ng/mlBetaine,；甜菜人激酶A錨定蛋白17A(AKAP-17A)ELISA試盒
大鼠角膜成纖維細胞提取物干擾素β(IFNβ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-脯氨

白介素1受體拮抗(IL1RA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-色氨

嗜中性粒細胞胞漿因子4(NCF4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-天冬氨

多功能肽酶2(LMP2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-谷氨

尾加壓素2受體(UTS2R)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-亮氨

尾加壓素2受體(UTS2R)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)N-叔氧羰基-L-氨

GATA結(jié)合蛋白1(GATA1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-絲氨

GATA結(jié)合蛋白2(GATA2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-纈氨

GATA結(jié)合蛋白5(GATA5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-L-天冬酰胺

免疫球蛋白E(IgE)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Boc-L-谷氨酰胺

抗P62抗體(AP62A)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Boc-L-氨 N-二酰亞胺酯

蛋白激酶抑制因子α(PKIα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-D-氨

狀腺球蛋白(TG)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-β-氨

組蛋白H2B(H2B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)(R)-N-BOC-3-碘代氨酯

抗核糖體P蛋白抗體(ARPA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)BOC-D-精氨鹽鹽

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細菌、真菌,、支原體污染,。