腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物現(xiàn)貨供應(yīng),，質(zhì)量有保證、*,、實(shí)驗(yàn)效果好,，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),，同時(shí)提供價(jià)格,、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格,、用途,、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號(hào)16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

人腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人腎上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人腎上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人腎組織和腫瘤組織中制備,。正常人腎組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量、電泳照片,、OD值測(cè)定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

產(chǎn)品名稱(chēng)	腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
英文名稱(chēng)	Human Kidney MatchPair: Normal Renal Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives
貨號(hào)	CS-X3808

 

細(xì)胞分類(lèi)：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出,，干冰運(yùn)輸給客戶(hù),。一般不推薦這種，也較少使用這種方式,，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好,；另外溫度對(duì)細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式,，快遞時(shí)間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù),，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，進(jìn)口來(lái)源,，保證5代以?xún)?nèi),，活力>95%，無(wú)細(xì)菌,、真菌,、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí),，可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,，需要時(shí),，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察,、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷(xiāo)售的相關(guān)產(chǎn)品： 

46.9pg/mlRutin,；蘆脫氧尿三檢測(cè)試盒

9.375pg/mlSerotonin hydrochloride,；5-羥基色胺鹽鹽脫氧核糖核酶Ⅰ檢測(cè)試盒

9.375pg/mlRhaponiticin；土大黃苷脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉檢測(cè)試盒

0.188ng/ml4-Hydroxyphenylacetic acid,；對(duì)羥基苯脫表雄酯檢測(cè)試盒

0.094ng/mlIbuprofen,；布洛芬脫表雄檢測(cè)試盒

0.188ng/mlDiclofenac sodium；雙氯芬鈉脫-γ-羧基凝酶原檢測(cè)試盒

0.188ng/mlBerberrubine,；小檗紅褪黑素檢測(cè)試盒

46.875pg/mlCisplatin,；順鉑突觸泡蛋白抗體檢測(cè)試盒

0.094ng/mlSodium cromoglycate；色苷鈉突觸泡蛋白檢測(cè)試盒

18.75pg/mlSambutoxin突觸回蛋白2檢測(cè)試盒
腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGFα)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)對(duì)羥基苯(標(biāo)準(zhǔn)品)

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)對(duì)羥基苯

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)盧立康唑

白介素9(IL9)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

白細(xì)胞激活黏附因子(ALCAM)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)亞硝鈷鈉

白細(xì)胞激活黏附因子(ALCAM)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)鈉

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)5-硝基-1,10-菲咯啉;5-硝基鄰菲啰啉

管生長(zhǎng)素(ANG)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)亞硝基鐵化鈉

管生長(zhǎng)素(ANG)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)鐵冬青(標(biāo)準(zhǔn)品)

管生成素1(ANGPT1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)酚藍(lán)鈉

管生成素1(ANGPT1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)百里香酚蘭鈉

管生成素2(ANGPT2)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)四苯硼鈉

管生成素2(ANGPT2)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)磺基水楊鈉

β細(xì)胞素(βTC)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)亞硝基紅鹽

β細(xì)胞素(βTC)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)玫瑰紅鈉