培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

人肺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人原代肺上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人原代肺上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人肺組織和腫瘤組織中制備,。正常人肺組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備肺上皮細(xì)胞和腫瘤原代組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序,；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進(jìn)口來源,，保證5代以內(nèi),，活力>95%，無細(xì)菌,、真菌,、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,，同時,，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.188ng/mlAmiodarone HCl,；鹽胺碘胎盤性酶檢測試盒

37.5pg/mlUridine 5'-Diphosphate Trisodium Salt/UTP.Na3,；尿苷-5'-三三鈉 胎盤蛋白13檢測試盒

5.625ng/mlBavachin；補(bǔ)骨脂二黃/補(bǔ)骨脂素胎盤催乳素檢測試盒

4.688U/mlMaackiain,；高麗槐素胎兒紅蛋白檢測試盒

0.094ng/mlDiosmetin-7-O-β-D-glucopyranoside,；香葉木素-7-O-葡萄糖苷胎兒纖連蛋白檢測試盒

18.75pg/mlRosmarinic acid；迷迭香鎖鏈素檢測試盒

1.875ng/mlProcyanidin B1,；原花青素B1羧基氨檢測試盒

0.469ng/mlArctiin,；牛蒡子苷/牛蒡苷羧化基質(zhì)谷氨蛋白檢測試盒

0.094ng/mlParthenolide；小白菊內(nèi)酯羧化不全骨鈣素檢測試盒

9.375pg/mlCalycosin,；毛蕊黃髓樣分化因子88檢測試盒
肺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物肌肌激酶(CKM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)雄烯二

骨保護(hù)素(OPG)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)雄烯二（標(biāo)準(zhǔn)品）

膽囊收縮素A受體(CCKAR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)赤芝A

基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)維生素E琥珀酯;D-α-生育酚琥珀酯

基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)伊沙匹隆

基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)5-基胞嘧啶

基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)7-基喜樹(標(biāo)準(zhǔn)品)

基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)7-基喜樹

基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)(+)-(3R)-7-[4-(4-氟苯基)-6-基-2-(N-基-N-磺酰氨基)嘧啶-5-基]-3-羥基-5-氧代-(6E)-己烯酯

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)(-)-Blebbistatin

基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)奈達(dá)鉑;順糖氨鉑

基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)SB 203580

基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)6-氨基-3-基嘌呤(3MA),；細(xì)胞自噬抑制

基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)黃嘌呤；2,6-二羥基嘌呤,；

基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Necrostatin1