詳細(xì)介紹
細(xì)胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,,由氮直液接拿出,干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,,很難說是細(xì)胞自身不行,,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,,也不是細(xì)胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,;干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,,QC通過后,,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,,常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,,只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購買到貨后,,由我們實(shí)驗室擴(kuò)增、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,,進(jìn)口來源,保證5代以內(nèi),,活力>95%,,無細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。
小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取物是從小鼠原代內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取的,小鼠原代內(nèi)臟脂肪細(xì)胞從正常小鼠脂肪組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究,。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠內(nèi)臟脂肪組織裂解液,離心去除組織碎片,,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存,。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,;<3>基因克隆與目標(biāo)測序,;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),;<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Mouse Fat: Normal Visceral Fat Cells Derivatives |
貨號 | CS-X3718 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,,并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,,包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,,同時,,可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀察,,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時,,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),,85%,;北美胎牛血清(United States,GIBCO,,貨號16000-044),,15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
28.1pg/ml進(jìn)口乳膠手套70只/盒(無菌獨(dú)立包裝) 10盒/箱 麥迪康FASTDIGEST TSCAI
46.875pg/ml進(jìn)口乳膠手套70只/盒(無菌獨(dú)立包裝) 10盒/箱 麥迪康FASTDIGEST CSII
0.938ng/ml進(jìn)口雙頭記號筆(黑) 12支/盒FASTDIGEST BMSI
46.875pg/ml進(jìn)口雙頭記號筆(紅) 12支/盒FASTDIGEST PTEI
0.469ng/ml進(jìn)口雙頭記號筆(藍(lán)) 12支/盒FASTDIGEST FOKI
9.375pg/ml進(jìn)口雙頭記號筆(黑) 12支/盒FASTDIGEST RRUI
0.234ng/ml進(jìn)口雙頭記號筆(紅) 12支/盒FASTDIGEST KFLI
18.75pg/ml進(jìn)口雙頭記號筆(藍(lán)) 12支/盒FASTDIGEST SAQAI
4.69ng/ml麥迪康 粉色 50只/盒 10盒/箱FASTDIGEST BFOI
9.375pg/ml麥迪康 藍(lán)色 50只/盒 10盒/箱FASTDIGEST PACI
小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取物高鐵紅蛋白還原酶(MHBR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯磺酰肼(>99.0%(HPLC),用于高效液相色譜標(biāo)記)
谷氨脫酶(GDH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)7-酰氧基-4-基香豆素(>98.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo))
谷胱甘肽(GSH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Br-Mmc (=4-基-7-氧基香豆素)(>98.0%(T))
谷胱甘肽過氧化酶1(GPX1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)3-基-7-氧基-1,4-苯并惡嗪-2-(>98.0%(T))
乳過氧化物酶(LPO)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)DBD-PZ [=4-(N,N-二氨基磺?;?-7--2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(HPLC))
核糖核酶A(RNASE1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)4-基-6,7-二氧基香豆素(>98.0%(HPLC))
狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) DBD-CO-Hz [=4-(N,N-二基氨基磺酰)-7-(N-肼基羰基-N-基)氨基-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(HPLC))
降鈣素原(PCT)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)NBD-CO-Hz [=4-(N-肼羰基-N-氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑](>95.0%(HPLC))
抗脫氧核糖核酶B(Anti-DNaseB)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)DBD-ED [=4-(N,N-二氨基磺酰)-7-(2-氨基基氨基)-2,1,3-苯并惡二唑]
抗神經(jīng)元核抗體1型(ANNA1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)AABD-SH (=4-酰氨基-7-巰基-2,1,3-苯并惡二唑](>94.0%(HPLC))
X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6(XRCC6)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)9-(基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T))
染色質(zhì)域解旋酶DNA結(jié)合蛋白3(CHD3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)DBD-COCl [=4-(N,N-二基氨磺酰)-7-(N-氯酰基-N-氨基)-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(T))
顆粒酶M(GZMM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)NBD-COCl [=4-(N-氯?;?N-氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑](>92.0%(T))
抗核膜糖蛋白210抗體(AGPA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)DBD-NCS [=4-(N,N-二基氨磺酰)-7-基-2,1,3-苯并惡二唑]
蛋白激酶Cδ(PKCδ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)氯-9-芴酯(>97.0%(HPLC)(T))