細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時(shí)間監(jiān)控,、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實(shí)際進(jìn)行人為的控制，同時(shí),，可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時(shí),，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué),、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影,、電視等多種手段,。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué),、免疫學(xué),、腫瘤學(xué)、生物化學(xué),、遺傳學(xué),、分子生物學(xué)等； 適用的對(duì)象范圍廣,，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物,，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究,。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)可提供大量,、同一時(shí)期、重復(fù)性好的,、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,。

大鼠食管平滑肌細(xì)胞提取物是從大鼠食管平滑肌細(xì)胞提取的，大鼠食管平滑肌細(xì)胞從正常大鼠食管組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠食管平滑肌組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號(hào)16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

46.875pg/mlParomomycin sulfate salt 巴龍人醛還原酶1-B10(Aldo-keto reductase family 1 member B10)ELISA試盒

9.375pg/mlPenicillin G Sodium salt 青G鈉鹽  Amresco人激酶A錨定蛋白17A(AKAP-17A)ELISA試盒

37.5pg/mlPenicillin G Sodium salt 青G鈉鹽  Amresco人載脂蛋白A-I結(jié)合蛋白(AI-BP)ELISA試盒

46.875pg/mlPenicillin G Sodium salt 青G鈉鹽  Amresco人載脂蛋白L1(Apolipoprotein L1)ELISA試盒

18.75pg/mlPenicillin G Sodium salt 青G鈉鹽  Amresco人多藥耐藥相關(guān)蛋白4(MRP4)ELISA試盒

37.5pg/ml青G鈉鹽,，細(xì)胞培養(yǎng)，99%人多藥耐藥相關(guān)蛋白6(MRP6)ELISA試盒

28.125pg/ml青G鈉鹽,，細(xì)胞培養(yǎng),，99%人多藥耐藥相關(guān)蛋白9(MRP9)ELISA試盒

46.875pg/ml青G鈉鹽，細(xì)胞培養(yǎng),，99%人多藥耐藥蛋白3(MDR3)ELISA試盒

18.75pg/ml青G鈉鹽,，細(xì)胞培養(yǎng)，99%人ATP-結(jié)合盒亞家族B成員5 (ABCB5)ELISA試盒

9.375pg/ml青G鈉鹽,，細(xì)胞培養(yǎng),，99%人果糖-二醛縮酶C(ALDOC)ELISA試盒
大鼠食管平滑肌細(xì)胞提取物信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)AEC；3-氨基-9-基咔唑

轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)4-氯-1-萘酚(4C1N)

蛋白激酶Bβ(PKBβ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)對(duì)苯胺藍(lán)(BCIP)

白介素2受體α(IL2Rα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)對(duì)硝基苯二鈉（PNPP）

絲裂原激活蛋白激酶激酶6(MAP2K6)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)ONPG,；鄰硝基苯-β-D-半乳糖苷

清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(SGK2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)親和素,；卵白素來源于雞蛋白

表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)鏈霉親和素

吡哆醛激酶(PDXK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)西他沙星

CD163分子(CD163)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)DHBS；3,5-二氯-2-羥基苯磺鈉

信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子5B(STAT5B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)NBD-PZ,；4-硝基-7-苯并氧雜噁二唑

生長分化因子2(GDF2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)BGP,；β-甘油鈉水合物(高純)

癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3(OIT3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Fura 2-AM;鈣熒光探針

B-細(xì)胞淋巴瘤因子3(Bcl3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)NBD-F；4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧雜惡二唑

胱天蛋白酶4(CASP4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)魯米諾,發(fā)光氨

激活STAT蛋白抑制因子1(PIAS1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Leu-pNA,；L-亮氨-4-硝基苯胺

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出,，干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說是細(xì)胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對(duì)細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式,，快遞時(shí)間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進(jìn)口來源,，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。