小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物現(xiàn)貨供應(yīng),，質(zhì)量有保證、*,、實(shí)驗(yàn)效果好,，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供價(jià)格,、說(shuō)明書(shū),、規(guī)格、用途,、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號(hào)16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取的，小鼠原代腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞從正常小鼠腦組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量、電泳照片,、OD值測(cè)定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序,；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

產(chǎn)品名稱	小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物
英文名稱	Mouse Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Endothelial CellsDerivatives
貨號(hào)	CS-X3705

 

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式，快遞時(shí)間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過(guò)后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購(gòu)買(mǎi)到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),，進(jìn)口來(lái)源，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無(wú)細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控,、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,，同時(shí)，可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí),，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

37.5pg/ml多功能蛋白聚糖(VS)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST NDEI

23.438pg/ml聚集蛋白聚糖(AGC)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST NDEI

0.938IU/ml觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST NOTI

0.188ng/ml白介素20(IL20)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST NOTI

0.938ng/ml脂肪合酶(FASN)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST NOTI

0.469ng/ml性葡萄糖苷酶β(GβA)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST NOTI

9.375pg/ml心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST PAEI

4.688ng/ml翻譯調(diào)節(jié)腫瘤蛋白1(TPT1)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST PSTI

0.094ng/mlBcl2/腺病E1B相互作用蛋白3(BNIP3)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST PSTI

0.938ng/ml骨成型蛋白4(BMP4)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)FASTDIGEST PVUI
小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物細(xì)胞性T-淋巴細(xì)胞關(guān)聯(lián)抗原4(CTLA4)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)去草凈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)

角蛋白18(KRT18)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)噻蟲(chóng)啉(標(biāo)準(zhǔn)品)

細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白(MEPE)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)殺蟲(chóng)環(huán)標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%,基體：醇)

周期素依性激酶4(CDK4)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)

殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)

蕈型膽受體M5(CHRM5)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)氟靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)

纖溶酶原(Plg)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)草達(dá)津(標(biāo)準(zhǔn)品)

纖維蛋白肽A(FPA)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)百蟲(chóng)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)

?；碳さ鞍?ASP)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)阿克泰(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)

角蛋白19(KRT19)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)三唑(分析標(biāo)準(zhǔn)品,，99.8%)

角蛋白20(KRT20)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)三唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,溶：石油醚)

Kruppel樣因子4(KLF4)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)基托布津(分析標(biāo)準(zhǔn)品)

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)無(wú)水鈉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm)

利鉀尿肽(KP)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)嘧磺隆(標(biāo)準(zhǔn)品)

心型脂肪結(jié)合蛋白(FABP3)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)西草凈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%)