詳細介紹
細胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,,由氮直液接拿出,,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,,也較少使用這種方式,,因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,,很難說是細胞自身不行,,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細胞,,QC通過后,,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,,購買到貨后,由我們實驗室擴增,、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進口來源,,保證5代以內(nèi),,活力>95%,無細菌,、真菌,、支原體污染。
小鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物是從小鼠原代表皮角質(zhì)形成細胞提取的,小鼠原代表皮角質(zhì)形成細胞從正常小鼠皮膚組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究,。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠表皮角質(zhì)形成組織裂解液,,離心去除組織碎片,,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,,-80度保存,。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆,;<2>mRNA選擇性剪接,;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot,;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),;<6>芯片研究與表達圖譜。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Mouse Skin: Normal Epidermal Keratinocytes Derivatives |
貨號 | CS-X3697 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,,包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,,可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,,需要時,,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),,85%,;北美胎牛血清(United States,GIBCO,,貨號16000-044),,15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進行凍存,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
9.375pg/ml生長分化因子11(GDF11)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion Hot Start II DNA Polymerase (2 U/µL)
18.75pg/ml核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)PHUSION HIGH-FIDELITY PCR KIT,
0.469ng/ml補體成分1r(C1r)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)PHUSION HIGH-FIDELITY PCR KIT,
46.875pg/ml生長調(diào)節(jié)致癌基因β(GROβ)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Hot Start DNA Polymerase
0.094ng/ml補體成分1s(C1s)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Hot Start DNA Polymerase
0.188ng/ml補體成分8γ(C8γ)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Green Hot Start DNA Polymerase, 2U/ul
0.469ng/ml 博來水解酶(BLMH)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Green Hot Start DNA Polymerase, 2U/ul
46.875pg/ml前梯度蛋白2(AGR2)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Multiplex PCR Master Mix
56.25pg/ml絡(luò)絲蛋白(RL)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Multiplex PCR Master Mix
0.188ng/ml狀腺激素反應(yīng)基因(THRSP)檢測試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phusion U Green Multiplex PCR Master Mix
小鼠表皮角質(zhì)形成細胞提取物花生四烯(AA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)六氯(標準品)
低密度脂蛋白(LDL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)正己酯(分析標準品,≥99.5%(GC))
肌細胞生成素(MYOG)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)六氯苯標準溶液(32.9mg/L,基體:醇)
85kDa核孔蛋白(NUP85)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)醇(分析標準品,>99.9%(GC))
107kDa核孔蛋白(NUP107)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯(標準品)
中性粒細胞性酶(NAP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酯(分析標準品,≥99.8%(GC))
胎蛋白質(zhì)體1(αFPL1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)茚(分析標準品,用于環(huán)境分析,>99.0%(GC))
胎蛋白質(zhì)體2(αFPL2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二十(分析標準品,≥99.5%(GC))
成纖維細胞生長因子23(FGF23)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)辛醇(分析標準品,≥99.5%)
CCAAT增強子結(jié)合蛋白γ(CEBPγ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酯(標準品)
補體1q(C1q)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)酯(分析標準品,≥99.7%(GC))
凝因子Ⅴ(F5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二醇二醚(分析標準品,≥99.7%(GC))
凝因子Ⅴ(F5)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2-基-1,3-己二醇(標準品)
凝因子ⅩⅢ(F13)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2,4-二氨基苯醚(分析標準品,用于環(huán)境分析)
凝因子ⅩⅢ(F13)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鄰苯二單(2-基己基)酯(標準品)