培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),，85%；北美胎牛血清(United States,，GIBCO,，貨號(hào)16000-044)，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取物是從大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取的，大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞從正常大鼠肺大動(dòng)脈組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌組織裂解液，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出,，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式,，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說是細(xì)胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式，快遞時(shí)間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進(jìn)口來源,，保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控,、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等,。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度,、氧氣,、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,，同時(shí)，可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí),，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué),、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

18.75pg/mlProtease Inhibitor Cocktail Set VIdNTP Mix (10 mM each)

0.188ng/mlProtease Inhibitor Cocktail Set IIIdNTP Mix (10 mM each)

0.188ng/mlProtease Inhibitor Cocktail Set IIIdNTP Mix (2 mM each)

9.375pg/mlBiodyne尼龍轉(zhuǎn)印B膜正電6,6 0.45umdNTP Mix (2 mM each)

18.75pg/mlBiodyne尼龍轉(zhuǎn)印C膜負(fù)點(diǎn)6,6 0.45umdNTP/dUTP Mix

18.75pg/mlMPbio弗氏*佐IPTG, DIOXANE-FREE

0.469ng/mlMPbio弗氏不*佐IPTG, DIOXANE-FREE

0.938ng/ml細(xì)胞刮,，柄長18cm 刮片長1.8cmX-GAL

0.469ng/ml大龍手動(dòng)大容量移液器（助理移液器）X-GAL

0.234ng/ml大龍TopPette移液器ATP Solution (100 mM)
大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取物內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)2,3-二苯基馬來酐(>95.0%(GC))

內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)7-(二基氨基)香豆素-3-羧(>98.0%(GC)(T))

內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)[[(3,5-二基-1H-吡咯-2-基)(3,5-二基-2H-吡咯-2-亞基)基]](二氟硼)(>98.0%(GC))

載脂蛋白E(APOE)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)7-(二氨基)香豆素-3-酯(>98.0%(GC)(T))

載脂蛋白E(APOE)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)6-[4-(二苯基氨基)苯基]香豆素-3-羧酯(>98.0%(HPLC))

載脂蛋白E(APOE)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)熒光素二鉀

過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)熒光素二酯(>98.0%(HPLC))

過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)7-羥基香豆素-3-羧(>98.0%(HPLC))

過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)4-二氨基偶苯-4'-(>97.0%(HPLC)(T))

粘蛋白2(MUC2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)7-二氨基-4-基香豆素(>98.0%(GC)(T))

C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)基鈣黃綠素藍(lán)水合物[用于配位滴定銅時(shí)的指示]

白三烯D4(LTD4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)6,7-亞二氧基-4-基-3-馬來酰亞胺香豆素(>98.0%(HPLC)(N))

單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)4-基-6,7-亞基二氧代香豆素(>99.0 %(GC))

尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)7-氧基香豆素-3-羧(>98.0%(GC)(T))

內(nèi)臟脂肪特性絲氨蛋白酶抑制因子(Vaspin)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)氯化頻哪醇(>90.0%(HPLC))