詳細(xì)介紹
細(xì)胞分類:
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,,干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,,一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,很難說是細(xì)胞自身不行,,還是復(fù)蘇沒操作好,;另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大,,也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的方式,,快遞時(shí)間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,;干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐),。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,QC通過后,,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大,,只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐),。
質(zhì)量保證:我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購(gòu)買到貨后,,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),,進(jìn)口來源,保證5代以內(nèi),,活力>95%,,無細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。
小鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取的,小鼠原代腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞從正常小鼠腎動(dòng)脈組織制備,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究,。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮組織裂解液,離心去除組織碎片,,通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存,。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,;<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序,;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué),;<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Mouse Kidney: Normal Renal Artery Derivatives |
貨號(hào) | CS-X3658 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控,、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,,同時(shí),,可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時(shí),,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察,、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),,85%,;北美胎牛血清(United States,GIBCO,,貨號(hào)16000-044),,15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品:
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0.938ng/ml基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)DREAMTAQ HS GREEN DNA POL
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0.188μg/ml睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)檢測(cè)試盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)DREAMTAQ HS GREEN DNA POL
小鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物高遷移率族蛋白1(HMG1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)優(yōu)級(jí)真空泵油(Viscosity Grade 150)
高遷移率族蛋白1(HMG1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)紫尿 一水合物(97%)
高遷移率族蛋白1(HMG1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)生育酚酯(標(biāo)準(zhǔn)品)
脫表雄(DHEA)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)正戊(標(biāo)準(zhǔn)品)
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)中烯菌核利標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)烯效唑(分析標(biāo)準(zhǔn)品97.5%)
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)β-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)
性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)β-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,溶:醇)
狀腺過氧化物酶(TPO)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)β-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)
管活性腸肽(VIP)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)δ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,溶:醇)
管活性腸肽(VIP)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)δ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)
管活性腸肽(VIP)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)δ-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)
P物質(zhì)(SP)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1017mol/L)
抗酒石性酶(ACP5)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)2-羥基-5-硝基煙(98%)
抗酒石性酶(ACP5)檢測(cè)試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)正己(無水級(jí), 95%)