培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States,，GIBCO,，貨號16000-044)，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

人前脂肪細胞提取物是從人前脂肪細胞提取的，人前脂肪細胞從正常人脂肪組織制備,。正常人脂肪組織采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人前脂肪組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學,；<6>芯片研究與表達圖譜,。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種，也較少使用這種方式,，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源,，保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設(shè)備,。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.094ng/ml載脂蛋白E(APOE)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hFerH/RU5'

28.125pg/ml吲哚(IAA)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hFerL

 9.375pg/ml補體C3轉(zhuǎn)化酶(C3c)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hFerL/RU5'

9.375pg/ml乳鐵傳遞蛋白(LTF)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-FLT1

46.875pg/ml乳鐵傳遞蛋白(LTF)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hFibronectin

1.875mIU/ml腎損傷分子1(Kim1)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hGAPDH

0.469ng/ml腎損傷分子1(Kim1)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hGFAP

18.75pg/ml腎損傷分子1(Kim1)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hGP2b

18.75pg/mlβ-內(nèi)肽(βEP)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hGRP78

0.188ng/mlβ-內(nèi)肽(βEP)檢測試盒(化學發(fā)光免疫分析法)pDRIVE-hGRP94
人前脂肪細胞提取物復(fù)合素2(CPLX2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)基烯酰胺(>98%)

組蛋白脫酰基酶2(HDAC2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)基磺(>98%,BR)

自噬相關(guān)16樣蛋白1(ATG16L1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)基磺鈉(分子生物學)

腺苷環(huán)化酶關(guān)聯(lián)蛋白2(CAP2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)乳酯(>98%,BR)

Rac-GTP酶激活蛋白1(RACGAP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)對羥基苯酯(>98%,BR)

BTG3關(guān)聯(lián)核蛋白(BANP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)桂酯(>98%,BR)

重肽鐵蛋白(FTH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二茉莉酯(植物激素級)

生長關(guān)聯(lián)蛋白43(GAP43)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)吲哚-4-羧酯(>98%,，BR)

二醛酶Ⅰ(GLO1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)次基綠(~65%,BS)

衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)亞紫3RAX(>90%,，BS)

外周蛋白(PRPH)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2-基琥珀(>98%,BR)

芳烴受體抑制因子(AHRR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)馬來酰肼(>98%，植物激素級)

Slit同源物1(Slit1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)間羥基苯(>98%,BR)

SRC/FGR/YES相關(guān)FYN癌基因(FYN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)3-羥基苯酯(>99%,BR)

肌醇-3-激酶催化亞基β肽(PIK3Cβ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鉬粉(>99%,BR)