培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

人子宮成纖維細(xì)胞提取物是從人子宮成纖維細(xì)胞提取的，人子宮成纖維細(xì)胞從正常人子宮組織制備,。正常人子宮組織采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量,、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人子宮成纖維組織裂解液,，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序,；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜,。

細(xì)胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大,，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好,，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細(xì)胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞,，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大,，只需加25元運(yùn)費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進(jìn)口來源，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,，同時,，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.094ng/ml雞主要組織相容性復(fù)合體(MHC/B)ELISA試盒LPS-PG Ultrapure

0.094ng/ml雞促黃體激素(LH)ELISA試盒CRX-527

0.188ng/ml雞L苯氨解氨酶(PAL)ELISA試盒 LPS-EB Biotin

0.094ng/ml雞脂多糖/內(nèi)素(LPS)ELISA試盒FLA-ST Ultrapure

0.094ng/ml雞白病抑制因子(LIF)ELISA試盒 Rec FLA-ST

0.094ng/ml雞層連蛋白/板層素(LN)ELISA試盒 FLA-ST Ultrapure

18.75ng/ml雞流行性型腦炎抗體IgG(JE IgG)ELISA試盒FLA-PA Ultrapure

0.094ng/ml雞白介素9(IL-9)ELISA試盒FLA-BS Ultrapure

0.469ng/ml雞白介素6(IL-6)ELISA試盒Rec FLA-ST

0.094ng/ml雞白介素4(IL-4)ELISA試盒 FLA-BS
人子宮成纖維細(xì)胞提取物單酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移酶2(MOGAT2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)青蒿琥酯（標(biāo)準(zhǔn)品）

二酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移酶同源物2(DGAT2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)青蒿琥酯

二酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移酶同源物1(DGAT1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)舒必利（標(biāo)準(zhǔn)品）

白細(xì)胞衍生趨化因子1(LECT1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)沙胺醇（標(biāo)準(zhǔn)品）

足盂蛋白(PCX)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)水楊鎂（標(biāo)準(zhǔn)品）

夏科雷登氏結(jié)晶蛋白(CLC)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)司坦唑醇

ⅫB組脂酶A2(PLA2G12B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)司坦唑醇（標(biāo)準(zhǔn)品）

DNA基轉(zhuǎn)移酶3B(DNMT3B)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)苯妥英鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）

WNT1誘導(dǎo)信號通道蛋白2(WISP2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)辛可尼（標(biāo)準(zhǔn)品）

沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鹽安他唑啉（標(biāo)準(zhǔn)品）

胰高糖素樣肽1受體(GLP1R)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)烏利司他

接觸蛋白1(CNTN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鹽酚芐（標(biāo)準(zhǔn)品）

蛋白激酶Cα(PKCα)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鹽氯那林(標(biāo)準(zhǔn)品)

Corin蛋白(CRN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)貝諾酯（標(biāo)準(zhǔn)品）

含硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)半乳糖（標(biāo)準(zhǔn)品）