培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。

人血管內(nèi)皮細胞提取物是從人原代血管內(nèi)皮細胞提取的,，人原代血管內(nèi)皮細胞從正常人血管內(nèi)皮組織制備。正常人血管內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院,，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化,。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量、電泳照片,、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量,。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管內(nèi)皮組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆,；<2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot,；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品,，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞,，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實驗室擴增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，進口來源，保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細菌、真菌,、支原體污染,。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時,，可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

0.281ng/ml人1,3-二甘油(1,3-DPG)ELISA試盒M-TriDAP

46.875pg/ml人1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)ELISA試盒M-TriLYS

0.938ng/ml雞蛋卵黃高蛋白肽(PPP)ELISA試盒Tri-DAP

0.094ng/ml雞卵黃免疫球蛋白(IgY)ELISA試盒PGN-ECndi ultrapure, insoluble

46.875pg/ml倉鼠狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試盒PGN-ECndss ultrapure, soluble

0.75nmol/ml倉鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試盒PGN-SAndi ultrapure, insoluble

0.188ng/ml倉鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/膠酶B(MMP-9/Gelatinase B) ELISA試盒Murabutide

9.375pg/ml 倉鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試盒C12-iE-DAP

46.875pg/ml豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試盒C14-Tri-LAN-Gly

0.094ng/ml豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試盒 N-Glycolyl-MDP
人血管內(nèi)皮細胞提取物2',5'-寡腺苷合成酶1(OAS1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)紫香酚苷（標(biāo)準(zhǔn)品）

白介素22受體α2(IL2Rα2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)紫花前胡苷（標(biāo)準(zhǔn)品）

腫廇蛋白P63(TP63)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)紫蓳靈（標(biāo)準(zhǔn)品）

橋粒芯膠粘蛋白1(DSC1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)紫云英苷（標(biāo)準(zhǔn)品）

夏科雷登氏結(jié)晶蛋白(CLC)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)棕櫚（標(biāo)準(zhǔn)品）

防御素α3(DEFα3)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)王不留行黃苷（標(biāo)準(zhǔn)品）

卵泡抑素樣蛋白1(FSTL1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)絡(luò)塞琳（標(biāo)準(zhǔn)品）

小板反應(yīng)蛋白2(THBS2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)絡(luò)緦（標(biāo)準(zhǔn)品）

晶狀體蛋白αB(CRYαB)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)AT7519.HCl

晶狀體蛋白αB(CRYαB)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)培利替尼;貝利替尼;EKB569

解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)雷公藤素（標(biāo)準(zhǔn)品）

小板衍生生長因子受體樣蛋白(PDGFRL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)番瀉苷C（標(biāo)準(zhǔn)品）

小板衍生生長因子受體樣蛋白(PDGFRL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)番瀉苷D（標(biāo)準(zhǔn)品）

饑餓素(GHRL)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)二辣椒（標(biāo)準(zhǔn)品）

管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)五味子酯（標(biāo)準(zhǔn)品）