細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際進行人為的控制,，同時,，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化,。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué),、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片,、縮時電影,、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,，如細胞學(xué),、免疫學(xué),、腫瘤學(xué)、生物化學(xué),、遺傳學(xué),、分子生物學(xué)等； 適用的對象范圍廣,，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織,，都可進行有針對性的研究,。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量、同一時期,、重復(fù)性好的,、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。

人肺大靜脈內(nèi)皮細胞提取物是從人原代肺大靜脈內(nèi)皮細胞提取的,，人原代肺大靜脈內(nèi)皮細胞從正常人肺大靜脈內(nèi)皮組織制備,。正常人肺大靜脈內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進行,。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量,。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究,。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度,、總含量,、電泳照片、OD值測定結(jié)果等,。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈,，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA,。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng),。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng),。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人肺大靜脈內(nèi)皮組織裂解液,，離心去除組織碎片,，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,，-80度保存,。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接,；<3>基因克隆與目標(biāo)測序,；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué),；<6>芯片研究與表達圖譜,。

培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%,；北美胎牛血清(United States,，GIBCO，貨號16000-044),，15%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。
?以下是公司正在銷售的相關(guān)產(chǎn)品： 

1.875ng/ml人抗凝酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試盒pUNO1-h-DN

0.094ng/ml人抗壁抗體(TA)ELISA試盒 pUNO1-hNOD2a-DN

46.875pg/ml人抗存活素抗體/生存蛋白(Surv)ELISA試盒pUNO1-hPKR-DN

0.188ng/ml人抗鏈球菌溶素O/抗O(ASO)ELISA試盒pUNO1-hRIGI-DN

0.188ng/ml人抗精子抗體(AsAb)ELISA試盒pUNO1-hSTING-A162

0.094ng/ml人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試盒pUNO1-hSTING-A230

1.875ng/ml人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試盒pUNO1-hSTING-beta

46.9pg/ml人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)ELISA試盒pUNO1-hSTING-H232

0.094ng/ml人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA試盒 pUNO1-hSTING-HAQ

18.75pg/ml人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)ELISA試盒 pUNO1-hSTING-M155
人肺大靜脈內(nèi)皮細胞提取物管緊張素Ⅲ(AngⅢ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)芒果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)

脊髓灰質(zhì)炎病受體相關(guān)分子4(PVRL4)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)芒果苷

胞漿蛋白1(STMN1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)毛蕊黃(標(biāo)準(zhǔn)品)

松弛肽(RLN)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)毛蕊黃苷（標(biāo)準(zhǔn)品）

抗膽受體抗體(Anti-AChR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)沒食子兒茶素（標(biāo)準(zhǔn)品）

Slit同源物1(Slit1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)沒食子兒茶素沒食子酯（標(biāo)準(zhǔn)品）

Ⅰ型前膠原(PCⅠ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)沒食子

Ⅲ型前膠原(PCⅢ)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)沒食子(標(biāo)準(zhǔn)品)

攝食抑制因子1(NES1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)埃博C

α白蛋白(AFM)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)沒食子酯(標(biāo)準(zhǔn)品)

催產(chǎn)素受體(OXTR)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)沒食子酯

熱休克轉(zhuǎn)錄因子2(HSF2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)2”-O-沒食子酰基金絲桃苷（標(biāo)準(zhǔn)品）

β2-微球蛋白(β2M)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)1,2,3,4,6-O-沒食子酰葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶ω1(GSTω1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)蒙花苷(標(biāo)準(zhǔn)品)

C-型凝集素域家族4成員K(CLEC4K)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)迷迭香（標(biāo)準(zhǔn)品）

細胞分類：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出,，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種，也較少使用這種方式,，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行,，還是復(fù)蘇沒操作好,；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量,；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐),。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實驗室擴增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源,，保證5代以內(nèi),，活力>95%，無細菌,、真菌,、支原體污染。