培養(yǎng)步驟:
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),，85%,；北美胎牛血清(United States，GIBCO,，貨號16000-044),，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現用現配。液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。

       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據標準方案進行,。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染,，同時保證質量的穩(wěn)定,。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài),，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能,。

      發(fā)貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上,，且不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1,、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2,、說明書及注意事項,；3、公司售后服務標準,。

      保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,，再進行后續(xù)的實驗操作,。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮,、-80℃冰箱或立即進行復蘇,。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用,。

細胞分類：

一種：
是凍存產品,，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶,。一般不推薦這種,，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,，一旦細胞狀態(tài)不好,，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好,；另外溫度對細胞,、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式,，快遞時間也很難控制,，多種因素影響產品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐),。
第二種：
是我們復蘇好細胞,，QC通過后,，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響,，常溫運輸也對細胞影響也不大,，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存,，凍存的產品全部經過QC檢測，進口來源,，保證5代以內,，活力>95%，無細菌,、真菌,、支原體污染。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結構、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在銷售的相關產品：

0.375ng/ml大鼠腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試盒Blasticidin (solution)

0.188ng/ml大鼠管舒緩激肽(BK)ELISA試盒Zeocin™ (solution)

46.9pg/ml大鼠骨特性性酶B(ALP-B)ELISA試盒Blasticidin (solution)

0.375mIU/ml大鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA試盒HEK-Blue™ CLR Selection

0.188ng/ml大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試盒HEK-Blue™ Selection

0.094ng/ml大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試盒Hygromycin B Gold (solution)

0.094ng/ml大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試盒Puromycin (solution)

0.094ng/ml大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試盒Zeocin™ (powder)

0.094ng/ml大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試盒Phleomycin (powder)

0.188ng/ml大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試盒G418 (solution)
人輸尿管上皮細胞過氧化物酶體增殖物激活受體δ(PPARδ)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)D-去腎上腺素酒石鹽

組蛋白脫?；?(HDAC1)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)N-芐氧羰基-6-氨基己

狀旁腺素受體1(PTHR1)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)N-(+)-生物素基-6-氨基己

輕肽鐵蛋白(FTL)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)維生素E

骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)D-α-生育酚琥珀鹽

骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)(+)-α-生育酚醋鹽

饑餓素/肥胖抑制素前激素原(GHRL)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)ent-那格列奈

20S-蛋白酶體(20S-PSM)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)ent-那格列奈?；?β-D-葡萄糖苷

20S-蛋白酶體(20S-PSM)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)那格列奈酰基-β-D-葡萄糖苷

蛋白酶體亞基α1(PSMα1)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)脫[1-(4,4-二氟代環(huán)己酰胺)-1-苯基]-3-羥基馬拉維若

肌球蛋白重鏈4(MYH4)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)4-羥苯基馬拉維若

肌球蛋白重鏈7(MYH7)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)依澤替米貝

肌球蛋白重鏈6(MYH6)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)3-O-酰依澤替米貝

5-羥色胺受體2A(HTR2A)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)依澤替米貝羥基β-D-葡萄糖苷

90kDa熱休克蛋白αB1(HSP90αB1)檢測試盒(酶聯免疫吸附試驗法)依澤替米貝β-D-葡萄糖苷