詳細介紹
公司采用全是進口原材料研,,發(fā)靈敏性高,高效性,,*抗體,,吸附均勻、吸附性好,,回收利用率高,、可靠性強,無效包退包換,,公司提供免費代測服務,,各種種屬ELISA試劑盒產品齊全,質量可靠,。
產品名稱:豬補體片斷5bELISA試劑盒
英文名稱: C5b ELISA kit
規(guī)格 :48T/96T
主要成分:酶標板,試劑,標準品等,。
試劑盒種屬:馬鈴薯,、鹿,、羊、雞,、鴨,、魚、人,、大鼠,、小鼠、豚鼠,、倉鼠,、裸鼠、兔子,、豬,、犬、猴,、馬,、牛等動植物,。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本,。例如適合檢測包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、灌洗液、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等標本..
標本的采集與保存:
1、血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 小時或4oC 過夜,,然后1000×g 離心20 分鐘,,取上清即
可,或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,,但應避免反復凍融,。
2、血漿:用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本,,并將標本在采集后的30 分鐘內于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘,,
取上清即可檢測,或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,,但應避免反復凍融,。
3、組織勻漿:
1) 取適量組織塊,,于預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,,加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨,,該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫,;反復凍融法可重復2 次),。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測,。
4,、其它生物標本:請1000×g 離心20 分鐘,取上清即可檢測,,或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,,但應避免反復凍融。
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關,,我司嚴格按照進行生產,,已獲得國家承認的“三證”,每一個產品都有對應的生產批號,,只要客戶提前下單,,我們就能為您提供新批次的產品,不必擔心會有過期的試劑,。我司的試劑,,值得您選擇。
2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,,在室溫下放置20-30 min后,,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,,這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度,,以滿足后面的測定需求。
二,、樣本
1.內源性干擾因素:包括類風濕因子,、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白,、異嗜性抗體,、某些自身抗體等;
類風濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG,;
②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理,;
③檢測抗原時,可用加入到標本稀釋液中使RF降解,;
補體的控制方法:
①用EDTA稀釋標本,;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標本溶血,、細菌污染,、保存時間過長或凝固不全等,;
控制方法:采血時規(guī)范操作,,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血,;收集標本時采用無菌試管,,經檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,,檢測時盡量采用新鮮標本,;對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清,。
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ELISA 試驗時,,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應作一式二份,,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,,說明有非特異性反應,,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應,,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好,。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時,。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,,觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值i大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml,。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度,。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應,,而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護,。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 ,。