注意事項：1．基礎程序,；2．擴增溫度和延伸溫度,；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應液的配制,；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學,；8．PCR擴增產(chǎn)物,；9．PCR反應體系與反應條件。

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

探針法：
芹菜源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關,。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對,。熒光基團連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,，熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進行延伸反應時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,，使得熒光基團與淬滅劑分離,。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累,。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系,。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度,。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例,。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
1. 標記6個離心管，分別為6,，5,，4，3,，2和1號,。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,，從6號管中取5 μL溶液到5號管中,，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照,。
6. 換槍頭,，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。
7. NC管中不加任何陽性對照,。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復,。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸,，繪制標準曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。5.換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。
7.換槍頭,，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。設置 qPCR 反應（20  μL 體系,，在樣品制備室進行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品：

KLK14  激肽釋放酶14抗體梔子苷京尼平苷

KLK13  激肽釋放酶13抗體大麥芽

KLK12  激肽釋放酶12抗體厚樸酚

KLK11  激肽釋放酶11抗體和厚樸酚

KLK10  激肽釋放酶10抗體番瀉苷A

KLK1  激肽釋放酶1抗體番瀉苷B

KLHL9  kelch樣蛋白9抗體標準品

KLHL8  Kelch樣蛋白8抗體番瀉苷C

KLHL7  kelch樣蛋白7抗體番瀉苷D

KLHL36/C16orf44  Kelch樣蛋白36抗體紫草素左旋紫草素

KLHL32  Kelch樣蛋白32抗體川楝素

KLHL31  Kelch樣蛋白31抗體川芎嗪

KLHL3  Kelch樣蛋白3抗體鹽酸川芎嗪

KLHL26  Kelch樣蛋白26抗體異鼠李素

KLHL25  Kelch樣蛋白25抗體D-+-木糖維生素B12酶聯(lián)免疫檢測試盒利血平

芹菜源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒β-興奮類藥物殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒櫟櫻酸

孔雀石綠殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒栗精胺

苯醇胺A殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒連翹苷

T-2素殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒連翹脂素

嘔吐素殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒連翹酯苷A

地克珠利殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒連翹酯苷B

醇代謝物殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒連翹酯苷E

替米考星殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒蓮心

嗪殘留酶聯(lián)免疫檢測試盒蓮心高酸鹽