木霉屬通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

產(chǎn)品名稱	木霉屬通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱	Trichoderma spp.
貨號(hào)	CP934817

儲(chǔ)存條件：

14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法：
木霉屬通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān),。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端,。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對(duì)于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度,。
二,、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對(duì)照,。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為6，5,，4,，3，2和1號(hào),。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭,，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍,，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照,。
6. 換槍頭,，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照,。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照,。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,，只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DN段作為陽(yáng)性對(duì)照,。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。5.換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。
6.換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用。
7.換槍頭,，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 4 號(hào)管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20  μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品：

Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363)  酸化D型阿片受體抗體 洋蔥曲霉

phospho-DDX58 (Thr170)  酸化DDX58抗體 匍匐放射毛霉或雅致放射毛霉

phospho-DDX58 (Ser8)  酸化DDX58抗體 匍匐放射毛霉或雅致放線毛霉

Phospho-DBC1 (Thr454)  酸化膀胱癌缺失基因1抗體 李克犁頭霉（傘枝梨頭霉）

phospho-DAXX (Ser671)  酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 李克犁頭霉或傘枝梨頭霉

phospho-DAXX (Ser517)  酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 皮狀絲孢酵母

phospho-DAXX (Ser495)  酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 貝雷絲孢酵母

木霉屬通用探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒phospho-DAXX (Ser213)  酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 擲抱酵母

Phospho-DARPP32(Thr75)  酸化多巴胺/cAMP調(diào)節(jié)蛋白抗體 栗酒裂殖酵母

Phospho-DARPP32(Thr34)  酸化多巴胺/cAMP調(diào)節(jié)神經(jīng)蛋白抗體 路德類酵母

phospho-DAG1 (Tyr892)  酸化肌萎縮相關(guān)蛋白DAG1抗體 多形魯酵母

Phospho-Dab1 (Tyr232)  酸化Disabled 1抗體 魯酵母

Phospho-Dab1 (Tyr220)  酸化Disabled 1抗體 羅斯酵母

Phospho-Dab1 (Ser491)  酸化Disabled 1抗體 洛格酵母

phospho-DAAM1 (Thr361)  酸化形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子1抗體 橢圓釀酒酵母雞痘病PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T

雞敗血支原體PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存50T

肌酸激酶測(cè)試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T

肌酸激酶測(cè)試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T

肌球蛋白Myoglobin-20℃保存100mg

肌苷Inosine,，F(xiàn)ree Base  室溫干燥保存5g

肌醇Inositol室溫干燥保存100g

霍亂弧菌熒光PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T

霍亂弧菌PCR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存50T

霍亂弧菌O1群CR檢測(cè)試盒 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存50T

注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間,；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理,；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。