微細(xì)毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，產(chǎn)品僅用于科研在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

產(chǎn)品名稱	微細(xì)毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒
英文名稱	Trichostrongylus tenuis
貨號	CP934831

微細(xì)毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法：
一,、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。產(chǎn)品僅用于科研
二,、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為6，5,，4,，3,，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍,，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得10E6拷貝/μL的陽性對照,。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中,，充分震蕩1分鐘,，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,，從5號管中取5 μL溶液到4號管中,，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照,。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步）,，每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸,，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout,。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。產(chǎn)品僅用于科研
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7，6,，5,，4,，3，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。5.換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
6.換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20  μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。產(chǎn)品僅用于科研
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
探針法：
aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān),。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端,。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時(shí),，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品：

Phospho-Bcr(Tyr177)  酸化T淋巴細(xì)胞受體抗體馬鈴薯葡萄糖瓊脂Potato dextrose agar

phospho-Bcl-xL/BCL2L1(Thr115)  酸化Bcl-xL蛋白抗體沙葡萄糖肉湯Sabouraud-dextrose broth

phospho-Bcl-xL/Bcl2L1 (Ser62)  酸化Bcl-xL(Ser62)抗體腸道菌增菌肉湯Enterobacteria enrichment broth-Mossel

Phospho-Bcl-2(Thr129)  酸化Bcl-2抗體結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂Violet red bile glucose agar

Phospho-Bcl-2(Ser70)  酸化Bcl-2抗體麥康凱肉湯MacConkey broth

Phospho-Bcl-2 (Thr56)  酸化Bcl-2抗體麥康凱瓊脂MacConkey agar

微細(xì)毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒phospho-Bcl 10(Ser218)  酸化Bcl-10抗體RV 沙增菌肉湯Rappaport Vassiliadis Salmonella EnrichmentBroth

phospho-BCAR1(Tyr410)  酸化乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1木糖，賴氨酸,，去氧膽酸鹽瓊脂Xylose, lysine, desoxycholate agar

phospho-Bax(Ser184)  酸化Bax抗體十六三銨瓊脂基礎(chǔ)Cetrimide agar base

Phospho-BAP1(Ser592)  酸化乳腺癌易感基因1抗體(人)甘露醇化鈉瓊脂培養(yǎng)基Mannitol-Salt Agar Medium

phospho-BAD(Ser99)  酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體梭菌加強(qiáng)培養(yǎng)基Reinforced Medium for Clostridia

phospho-BAD(Ser75)  酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)Columbia Agar Base

Phospho-Bad(Ser155)  酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體瓊脂培養(yǎng)基 C含抗生素的沙葡萄糖瓊脂Sabouraud-glucose Agar with antibiotics

Phospho-Bad(Ser136)  酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體肉湯培養(yǎng)基 D水合乳糖肉湯Lactose Monohydrate Broth

Phospho-Bad(Ser134)  酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體肉湯培養(yǎng)基 I四硫磺酸鹽膽鹽亮綠肉湯Tetrathionate Bile Brilliant Green BrothTBG Broth肝素鋰Heparin Lithium Salt 室溫保存1g

肝/肌糖元測試盒 Oxidative Stress Detection Kit常溫保存48 T

甘油 -3- 酸脫酶Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase  -20℃保存500UN

甘油Glycerol   室溫保存100mL

甘氨酸二肽Glycylglycine室溫干燥保存10g

甘氨酸Glycine   室溫干燥避光保存100g

鈣調(diào)神經(jīng)酸酶測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T

鈣離子載體Calcium Ionophore A23187室溫避光保存1mg

鈣蛋白酶抑制Ⅱ溶液,，10mg/mLCalpain Inhibitor Ⅱ Solution-20℃保存10mL

鈣蛋白酶抑制Ⅰ溶液，10mg/mLCalpain InhibitorⅠSolution-20℃保存10mL