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詳細(xì)介紹
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Streptococcus mitis |
貨號 | CP934749 |
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法：
輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān),。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端,。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度,。
二,、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為6,，5，4,，3,，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍,，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得10E6拷貝/μL的陽性對照,。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中,，充分震蕩1分鐘,，得10E5拷貝/μL的陽性對照,。
6. 換槍頭,，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照,。
7. NC管中不加任何陽性對照,。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）,。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。
6.換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
7.換槍頭,，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照,。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品：
PMP2 周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體大鼠CDP-甘油二酯--甘油-3-酸3脂酰轉(zhuǎn)移酶,線粒體(PGS1)ELISA試盒
PML/TRIM19 早幼粒細(xì)胞白血病蛋白抗體大鼠CDCP1 ELISA試盒
PMCA4B 細(xì)胞膜鈣ATP酶4B抗體大鼠CD8分子(CD8)ELISA試盒
PMCA4/Calcium Pump PMCA4 ATPase 細(xì)胞膜鈣ATP酶4抗體大鼠CD68分子(CD68)ELISA試盒
PMCA1 細(xì)胞膜鈣ATP酶1抗體大鼠CD63分子(CD63)ELISA試盒
輕型鏈球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒PMCA 細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶抗體大鼠CD4分子(CD4)ELISA試盒
PMA/Prostate Mucin Antigen 前列腺粘蛋白抗原抗體大鼠CD45分子(CD45)ELISA試盒
Plzf 早幼粒細(xì)胞白血病鋅指蛋白抗體大鼠CD44分子(CD44)ELISA試盒
PLTP 脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體大鼠CD34分子(CD34)ELISA試盒
PLSCR3 脂爬行酶3抗體大鼠CD30分子(CD30)ELISA試盒
PLRP1/PNLIPRP1 胰脂肪酶相關(guān)蛋白1抗體大鼠CD19分子(CD19)ELISA試盒
PLK5 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶5抗體大鼠CD117分子(CD117)ELISA試盒
PLK4/STK18 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶18大鼠CC趨化因子受體9(CCR9)ELISA試盒
PLK1 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體大鼠C-C趨化因子6(CCL6)ELISA試盒
PLGLB2 纖溶酶相關(guān)蛋白B2抗體大鼠CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試盒生物素化山羊抗親和素Biotin Goat Anti Avidin Ab-20℃保存0.5mg
生物素化的牛血清白蛋白Biotin-BSA-20℃保存25mg
生物素化的辣根過氧化物酶Biotin-HRP-20℃保存5mg
生物素化的性酸酶（AP）Biotin-AP-20℃保存1mg
生物素化的β- 半乳糖苷酶Biotin-β-Galctosidase-20℃保存100U
生物素化蛋白LBiotin-Protein L-20℃保存0.5mg
生物素化蛋白GBiotin-Protein G-20℃保存0.5mg
生物素化蛋白ABiotin-Protein A-20℃保存1mg
生物素標(biāo)記的Oligo（dT）Biotinylated Oligo (dT)常溫5ug
生物素標(biāo)記dUTP溶液（1mM）Biotin-11-dUTP-20℃保存50uL
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