化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Cyprinid Herpesvirus(CyHV-II) |
貨號(hào) | CP934127 |
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
探針法：
鯉皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對,。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端,，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時(shí),，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅,。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系,。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性,。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA,。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度,。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6,，5,，4，3,，2和1號(hào),。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）,。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照,。
5. 換槍頭,，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘,，得10E5拷貝/μL的陽性對照,。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照,。
7. NC管中不加任何陽性對照,。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù),。PCR后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容,。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）,。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。5.換槍頭,，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用,。
6.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號(hào)管中,，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
7.換槍頭,，在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號(hào)管中,，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照,。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分,。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品：
3,4-二氟苯腈鈣離子膜通道鈣泵PMCA（P型ATP酶/質(zhì)膜）功能熒光檢測試盒
3,5-二氟苯腈鈣離子膜通道鈣泵SERCA（P型ATP酶/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）功能熒光檢測試盒
2,5-二氟苯腈鈣離子膜通道鈉鈣交換體（NCX/線粒體）功能熒光檢測試盒
N-Boc-酪胺鈣離子膜通道鈉鈣交換體（NCX/質(zhì)膜）功能熒光檢測試盒
2-基噻唑-4-酸酯鈣離子膜通道鈉鈣交換體（NCX/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）功能熒光檢測試盒
4-氟-3-氧基苯胺鈣離子膜通道內(nèi)質(zhì)網(wǎng)利羅受體（ryanodine receptor,；RyR）功能熒光檢測試盒
L-苯甘氨酰胺鈣離子膜通道內(nèi)質(zhì)網(wǎng)肌醇1,4,5-三酸受體（IP3R）功能熒光檢測試盒
順式-2,6-二基嗎啉鈣離子膜通道二吡啶受體（DHPR）功能熒光檢測試盒
亞氨基芪鈣泵PMCA蛋白表達(dá)檢測試盒
鯉皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR檢測試劑盒3-基-6-硝基-1H-吲唑鈣泵SERCA蛋白表達(dá)檢測試盒
3-硝基-4-(2-羥氨基)苯酚鈣鈉交換體NCX蛋白表達(dá)檢測試盒
3--5-氧基苯酚RyR受體蛋白表達(dá)檢測試盒
異山梨醇IP3R受體蛋白表達(dá)檢測試盒
6--4-喹啉DHPR受體蛋白表達(dá)檢測試盒
2-(氧基羰基)苯硼酸(4,4,5,5-四基二醇)酯鎂離子膜通道轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測試盒高車前素Hispidulin1447-88-720mgHPLC≥98%
高麗槐素；馬卡因Maackiain19908-48-620mgHPLC≥98%
高良姜素,；3，5,，7-三羥基黃酮Galangin548-83-420mgHPLC≥98%
高三尖杉酯堿,；高粗榧?jí)A，高哈林通堿Homoharringtonine26833-87-420mgHPLC≥98%
高香草酸,；4-羥基-3-氧基苯酸Homovanillic acid306-08-120mgHPLC≥98%
戈米辛GGomisin G62956-48-320mgHPLC≥98%
戈米辛JGomisin J66280-25-920mgHPLC≥98%
格列風(fēng)內(nèi)酯Griffonilide61371-55-920mgHPLC≥98%
葛根素,；葛根黃酮Puerarin3681-99-020mgHPLC≥98%
根皮苷Phlorizin60-81-120mgHPLC≥98%
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