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肥胖帶絳蟲PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
閱讀：170 發(fā)布時(shí)間：2024-1-26| 提 供 商 | 上海莼試生物技術(shù)有限公司 | 資料大小 | 12.6KB |
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肥胖帶絳蟲PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。酶是一種有機(jī)催化劑,，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
肥胖帶絳蟲PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)規(guī)則：
1,、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過(guò)2%,?？捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正,。
2,、要配備20ul,、50ul、100ul,、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,，要更換槍頭,。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
3,、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定,。
4,、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存,。
5,、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確,。
6,、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸,，減少誤差,。
7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去,。
8,、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,，混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
9,、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
10,、對(duì)結(jié)果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證,。
肥胖帶絳蟲PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞,、血液,、細(xì)菌等很多材料,，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析,。
肥胖帶絳蟲PCR檢測(cè)試劑盒主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì),、RNA提取、cDNA合成,、qPCR,。