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小鼠神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中,，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。

2.研究條件可以人為控制

pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,，同時,，可以施加化學(xué)、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。

4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。