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大鼠骨骼肌組織提取物操作流程：

1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413）,，co2孵箱（日本yamato it-61）。

1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：

1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱,，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃,、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng),。

1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí),，用0.25%胰酶消化1～2min,，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮,、分散,，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基,，溫和混勻,，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞,。

1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀(guān)察 在倒置顯微鏡下觀(guān)察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征,。

1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓,、脫壁并浮起,，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液,。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,，用10×物鏡觀(guān)察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù),。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104,。

1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液,，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,，加入胰消化酶消化,、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值,，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％,，計(jì)算貼壁率。 

1.6 生長(zhǎng)曲線(xiàn) 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,，以1×104/孔接種于24孔板,，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值,。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),。