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人apelin 12(AP12)ELISA Ki實驗方法操作步驟

閱讀:846          發(fā)布時間:2024-5-17

人apelin 12(AP12)ELISA Ki實驗方法操作步驟:

1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔,、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)

2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照 50µl,。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,,

3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。

4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,,如此 重復(fù) 5 次,拍干,。

6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,,空白孔除外。

7.溫育:操作同 3,。

8.洗滌:操作同 5,。

9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色

15 分鐘.

10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11.測定:以空白空調(diào)零,,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。


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