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異源曼氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒試劑準(zhǔn)備方法

閱讀:1093          發(fā)布時(shí)間:2021-3-23

異源曼氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒試劑準(zhǔn)備方法:

1. DNA模板

2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM

5.Taq酶操作步驟 

1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物1(10pM)               2μl

       引物2(10PM)              2μl

       Taq酶(2U/μl)            1μl

      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl

      加ddH2O至               50 μl

    視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油。

2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,后在72℃ 保溫7min,。

3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。

4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。

小鼠血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)elisa檢測(cè)試劑盒
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小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR-1/Flt1)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)elisa檢測(cè)試劑盒
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