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基因合成儀原理
1,、sanger法：雙脫氧測序的原理,，DNA合成時(shí)加上一個(gè)ddNTP從而終止這條鏈的延伸,，毛細(xì)管電泳讀取分析序列。一般教材講的都是這種方法,，經(jīng)典,，讀長800bp，但是通量小成本高,。
2,、高通量測序方法：454也稱焦磷酸測序，一個(gè)run下來約400M的數(shù)據(jù)量,。將emulsionPCR產(chǎn)物連磁珠上,，放入Pico Titer Plate，測序反應(yīng)是通過釋放PPi經(jīng)過ATP硫酸化酶和熒光素酶作用發(fā)光,，CCD捕捉拍照,，反應(yīng)是連續(xù)的，所以遇到連續(xù)的堿基如polyA時(shí),，454易產(chǎn)生誤差,。
3、Solexa：邊合成邊測序,，將DNA單鏈固定在芯片上,，合成DNA簇，是一種可逆阻斷的合成反應(yīng),，每個(gè)循環(huán)只加上一個(gè)堿基,、系統(tǒng)拍照一次。通過讀取拍照信號分析序列,，一個(gè)run約200個(gè)G數(shù)據(jù)量以上,。目前能量最高，不足是讀長短,，現(xiàn)在有PE150,，可以測通300bp。
4,、Ion torrent：特點(diǎn)是小巧,。試劑通過集成的流體通路進(jìn)入芯片中，密布于芯片上的反應(yīng)孔立即成為上百萬個(gè)微反應(yīng)體系,。這種流體體系,、微體系機(jī)械設(shè)計(jì)和半導(dǎo)體的技術(shù)組合，使研究人員能夠在2小時(shí)內(nèi)獲取從10Mb到1Gb以上的高精確度序列,。*新一種,，還沒廣泛應(yīng)用。