衡量凝膠成像分析系統(tǒng)性能的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括光學(xué)性能參數(shù),、成像參數(shù)、分析軟件參數(shù)等多個(gè)方面,,以下是具體介紹:
光源強(qiáng)度與均勻性
強(qiáng)度:足夠的光源強(qiáng)度是保證弱信號(hào)樣品能夠被清晰成像的基礎(chǔ),,強(qiáng)度越高,可檢測(cè)的樣品熒光或化學(xué)發(fā)光信號(hào)下限越低,,對(duì)于低表達(dá)量的核酸,、蛋白質(zhì)等樣品檢測(cè)更有利。
均勻性:光源均勻性好,,能確保凝膠上各個(gè)區(qū)域受到的光照強(qiáng)度一致,,使成像結(jié)果中條帶的亮度和顏色均勻,避免出現(xiàn)明暗不均的現(xiàn)象,,有利于準(zhǔn)確分析條帶的強(qiáng)度和形狀,。
濾光片性能
波長(zhǎng)準(zhǔn)確性:濾光片的波長(zhǎng)準(zhǔn)確性決定了能否精確地選擇特定波長(zhǎng)的光,對(duì)于多色熒光成像等應(yīng)用至關(guān)重要,,準(zhǔn)確的波長(zhǎng)選擇可以有效分離不同熒光標(biāo)記的信號(hào),,避免信號(hào)之間的干擾。
帶寬:帶寬較窄的濾光片可以更好地過(guò)濾掉雜散光,提高圖像的對(duì)比度和分辨率,,使熒光信號(hào)更加純凈,,背景噪音更低。
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分辨率
圖像分辨率:通常用像素來(lái)表示,,如 4800 萬(wàn)像素等,,高分辨率能夠清晰地分辨凝膠上的細(xì)微條帶,即使是分子量相近的核酸或蛋白質(zhì)條帶也能區(qū)分開(kāi)來(lái),,有助于準(zhǔn)確分析條帶的數(shù)量,、位置和形態(tài)。
空間分辨率:指系統(tǒng)能夠分辨的兩個(gè)相鄰物體之間的最小距離,,空間分辨率越高,,對(duì)凝膠上相鄰條帶的分辨能力越強(qiáng),能夠更精確地測(cè)量條帶的寬度和間距,。
靈敏度
最-低檢測(cè)限:表示系統(tǒng)能夠檢測(cè)到的最小熒光或化學(xué)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度,,低檢測(cè)限意味著系統(tǒng)可以檢測(cè)到極微量的樣品,對(duì)于研究低豐度表達(dá)的基因或蛋白質(zhì)非常重要,。
量子效率:成像設(shè)備(如 CCD 或 CMOS 相機(jī))的量子效率越高,,對(duì)光子的捕捉能力就越強(qiáng),,能夠?qū)⒏嗟墓庑盘?hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)或數(shù)字信號(hào),,從而提高系統(tǒng)的靈敏度。
動(dòng)態(tài)范圍
線(xiàn)性動(dòng)態(tài)范圍:指系統(tǒng)在能夠準(zhǔn)確測(cè)量的信號(hào)強(qiáng)度范圍內(nèi),,輸出信號(hào)與輸入信號(hào)呈線(xiàn)性關(guān)系的范圍,。寬線(xiàn)性動(dòng)態(tài)范圍可以保證在檢測(cè)不同濃度的樣品時(shí),信號(hào)強(qiáng)度與樣品量之間都能保持準(zhǔn)確的線(xiàn)性關(guān)系,,便于進(jìn)行定量分析,。
動(dòng)態(tài)范圍跨度:即系統(tǒng)能夠檢測(cè)到的最-強(qiáng)信號(hào)與最弱信號(hào)之間的比值,跨度越大,,說(shuō)明系統(tǒng)能夠同時(shí)準(zhǔn)確檢測(cè)到的信號(hào)強(qiáng)度范圍越廣,,無(wú)論是高表達(dá)量的強(qiáng)信號(hào)樣品還是低表達(dá)量的弱信號(hào)樣品,都能在同一成像中得到準(zhǔn)確的顯示和分析,。