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R2A瓊脂培養(yǎng)基

用途：R2A瓊脂培養(yǎng)基用于純化水中菌落總數(shù)的測定，（EP,、USP,、Chp標準）

配方：

用法：稱取本品18.18g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鐘,備用。

檢驗原理：

酵母浸出粉,、蛋白胨,、酸蛋白水解物提供氮源、維生素,、生長因子,；葡萄糖、為可發(fā)酵糖類,；可溶性淀粉可以吸收菌在復(fù)蘇過程產(chǎn)生的有害物質(zhì),；丙酮酸鈉可增強細菌的復(fù)蘇,。磷酸氫二鉀為酸堿緩沖劑；無水硫酸鎂提供二價陽離子,；瓊脂為凝固劑,。

不同藥典關(guān)于純化水的微生物檢測方法和質(zhì)量標準

中國藥典

【檢查】

微生物限度 取本品不少于 1ml，按薄膜過濾法處理后,，采用 R2A 瓊脂培養(yǎng)基,，30～35℃培養(yǎng)不少于 5 天，依法檢查（通則 1105）,，每1ml 供試品中需氧菌總數(shù)不得過 100cfu,。

操作簡述：

除葡萄糖、瓊脂外,，取上述成分,，混合，微溫溶解,，調(diào)節(jié) pH 值使加熱后在 25℃的 pH值為 7.2±0.2,，加入瓊脂，加熱溶化后,，再加入葡萄糖,，搖勻，分裝,，滅菌,。 R2A 瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查試驗 照通則 1105 中“計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查"的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌,。應(yīng)符合規(guī)定,。

USP標準

在美國藥典中，推薦使用0.45μm薄膜過濾法,，并同時使用高營養(yǎng)培養(yǎng)基（平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（PCA））于30-35℃培養(yǎng)72小時以上,，和低營養(yǎng)培養(yǎng)基（R2A瓊脂）于20-25℃培養(yǎng)96小時以上。檢測標準為：≤100cfu/ml ,。

操作簡述：（可根據(jù)實際情況調(diào)整）

量取10ml充分混勻的水樣,，以無菌操作加入安裝好的薄膜過濾器內(nèi)，過濾,。并用 pH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,，每張濾膜每次沖洗量為100ml,共沖洗1次。過濾后,，取出濾膜,，正面朝上貼于瓊脂平板上。共制備 2張濾膜，一張濾膜貼于平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板（高營養(yǎng)培養(yǎng)基）置30℃~35℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)2~3天,，計數(shù),。另一張濾膜貼于R2A瓊脂平板（低營養(yǎng)培奍基），置20℃~25℃生化培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)5~7天,，計數(shù),。以培養(yǎng)基平板上菌落數(shù)生長較多者作為檢測結(jié)果， 按比例折算為1ml純化水中的微生物數(shù)量后報告,。

EP標準

在歐洲藥典中使用薄膜過濾法（0.45μm 孔徑濾膜）,，使用 R2A 瓊脂培養(yǎng)基在 30℃～35℃培養(yǎng) 5 天以上。 質(zhì)量標準：≤100cfu/mL,。

操作簡述：（可根據(jù)實際情況訓(xùn)整）

量取 10ml 充分混勻的水樣,，以無菌操作加入 安裝好的薄膜過濾器內(nèi)，過濾,。并用 pH7.0 的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜 每次沖洗量為 100ml,，共沖洗 1 次。過濾后,，取出濾膜,，正面朝上貼于 R2A 瓊脂平板上, 置 30℃～35℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng) 5 天，計數(shù),。按比例折算為 1ml 純化水中的微生物數(shù)量后 報告,。