R2A瓊脂培養(yǎng)基

用途：R2A瓊脂培養(yǎng)基用于純化水中菌落總數(shù)的測(cè)定,，（EP,、USP、Chp標(biāo)準(zhǔn)）

配方：

用法：稱取本品18.18g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鐘,備用,。

檢驗(yàn)原理：

酵母浸出粉,、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源,、維生素,、生長(zhǎng)因子；葡萄糖,、為可發(fā)酵糖類,；可溶性淀粉可以吸收菌在復(fù)蘇過(guò)程產(chǎn)生的有害物質(zhì)；丙酮酸鈉可增強(qiáng)細(xì)菌的復(fù)蘇,。磷酸氫二鉀為酸堿緩沖劑,；無(wú)水硫酸鎂提供二價(jià)陽(yáng)離子；瓊脂為凝固劑,。

不同藥典關(guān)于純化水的微生物檢測(cè)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中國(guó)藥典

【檢查】

微生物限度 取本品不少于 1ml,，按薄膜過(guò)濾法處理后，采用 R2A 瓊脂培養(yǎng)基,，30～35℃培養(yǎng)不少于 5 天,，依法檢查（通則 1105），每1ml 供試品中需氧菌總數(shù)不得過(guò) 100cfu,。

操作簡(jiǎn)述：

除葡萄糖,、瓊脂外，取上述成分,，混合,，微溫溶解,，調(diào)節(jié) pH 值使加熱后在 25℃的 pH值為 7.2±0.2，加入瓊脂,，加熱溶化后,，再加入葡萄糖，搖勻,，分裝,，滅菌。 R2A 瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查試驗(yàn) 照通則 1105 中“計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查"的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查方法進(jìn)行,，試驗(yàn)菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌,。應(yīng)符合規(guī)定。

USP標(biāo)準(zhǔn)

在美國(guó)藥典中,，推薦使用0.45μm薄膜過(guò)濾法,，并同時(shí)使用高營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基（平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（PCA））于30-35℃培養(yǎng)72小時(shí)以上，和低營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基（R2A瓊脂）于20-25℃培養(yǎng)96小時(shí)以上,。檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為：≤100cfu/ml ,。

操作簡(jiǎn)述：（可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整）

量取10ml充分混勻的水樣，以無(wú)菌操作加入安裝好的薄膜過(guò)濾器內(nèi),，過(guò)濾,。并用 pH7.0的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml,共沖洗1次,。過(guò)濾后,，取出濾膜，正面朝上貼于瓊脂平板上,。共制備 2張濾膜,，一張濾膜貼于平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板（高營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基）置30℃~35℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)2~3天，計(jì)數(shù),。另一張濾膜貼于R2A瓊脂平板（低營(yíng)養(yǎng)培奍基）,，置20℃~25℃生化培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)5~7天，計(jì)數(shù),。以培養(yǎng)基平板上菌落數(shù)生長(zhǎng)較多者作為檢測(cè)結(jié)果,， 按比例折算為1ml純化水中的微生物數(shù)量后報(bào)告。

EP標(biāo)準(zhǔn)

在歐洲藥典中使用薄膜過(guò)濾法（0.45μm 孔徑濾膜）,，使用 R2A 瓊脂培養(yǎng)基在 30℃～35℃培養(yǎng) 5 天以上。 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：≤100cfu/mL,。

操作簡(jiǎn)述：（可根據(jù)實(shí)際情況訓(xùn)整）

量取 10ml 充分混勻的水樣,，以無(wú)菌操作加入 安裝好的薄膜過(guò)濾器內(nèi)，過(guò)濾,。并用 pH7.0 的無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜 每次沖洗量為 100ml,，共沖洗 1 次,。過(guò)濾后，取出濾膜,，正面朝上貼于 R2A 瓊脂平板上, 置 30℃～35℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng) 5 天,，計(jì)數(shù)。按比例折算為 1ml 純化水中的微生物數(shù)量后 報(bào)告,。