技術(shù)背景：

單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn),，促進了免疫學等學科的發(fā)展,，該技術(shù)廣泛用于醫(yī)學領(lǐng)域，已成為重要的臨床診斷手段和有效的藥物治療方法, 特別是治療性單克隆抗體已成為近幾年來生物制藥業(yè)發(fā)展迅速的領(lǐng)域之一, 同時,，也為一些新技術(shù)提供了基礎平臺,，如抗體偶聯(lián)藥物、雙特異性抗體及新興的CAR-T細胞治療等。單克隆抗體作為一種治療惡性腫瘤和炎癥性疾病的被動免疫制劑進入臨床使用,，再進一步發(fā)展至其他領(lǐng)域,，包括神經(jīng)系統(tǒng)疾病（如阿爾茲海默病等）及自身免疫疾?。ㄈ缂t斑狼瘡等）,。
　　抗體功能取決于其與靶抗原結(jié)合的表位，表位是抗原的一部分,，與抗體的可變區(qū)結(jié)合，與不同表位結(jié)合發(fā)揮特定的功能,，這些功能可能表現(xiàn)為抑制活性或激活某個信號等,。單克隆抗體的表位分析能促進抗體治療的發(fā)展，指導疫苗的設計,，評估免疫者體內(nèi)保護性抗體的反應,，或是定位抗菌劑作用于病原微生物的靶點。單克隆抗體與相應抗原的反應性決定于其所識別的抗原表位,，確定相應表位在抗原結(jié)構(gòu)上的位置是單克隆抗體篩選中關(guān)鍵步驟,。同時，可進一步分析這類表位的差異,，正確評價單克隆抗體的特異性和交叉反應性,，可用于評價某抗原表位是某種菌株不同血清型的共同表位，還是特異表位,。
　　隨著抗體技術(shù)的發(fā)展,，抗原表位分析顯得尤為重要，由于單克隆抗體具有高度均一性及對靶分子的高親和性,、特異性,，已廣泛應用于自身免疫性疾病、炎性疾病和癌癥的治療,。單克隆抗體與相應抗原的反應性決定于其所識別的抗原表位,，確定相應表位在抗原結(jié)構(gòu)上的位置是單克隆抗體篩選中的關(guān)鍵步驟。現(xiàn)在幾種單克隆抗體表位的分析方法,，包括ELISA法,、生物酶解法及化學切割法、噬菌體隨機肽庫,、X-射線晶體學,、丙氨酸掃描、氫氘交換質(zhì)譜（hydrogen/deuteriumexchange mass spectrometry, HDX-MS）,、生物信息學表位預測方法等等,，艾柏森公司基于多種成熟的技術(shù)平臺，提供完善多樣的單克隆抗體表位作圖技術(shù)，包括幾種單克隆抗體表位的分析方法,，客戶可有X-射線晶體學,，肽庫，LC-MS,，三維電鏡,，生物信息學預測多種選擇。

技術(shù)原理：

蛋白質(zhì)抗原被降解為小片段,，經(jīng)測序后確定抗體結(jié)合的位點,。雖然其結(jié)果在蛋白化學中是非常完美的例子，但是要確定某一抗原的全部表位需要大量的時間,。分子克隆技術(shù)和肽鏈合成方法的進展極大地促進了表位作圖方法的改進?，F(xiàn)已可以通過誘變、蛋白質(zhì)合成或蛋白競爭結(jié)合方法鑒定其表位,。此外,，表位序列測定的應用對抗體結(jié)合表位的分析具有顯著的*性。表位作圖方法也可用在其他方面的研究,，如蛋白質(zhì)功能活性的定位,，以及特殊標志的結(jié)合區(qū)分析。通過重組cDNA克隆的Tn5轉(zhuǎn)座子誘變技術(shù)獲得的瘧原蟲表面抗原表位作圖,。

表位分類：

表位可根據(jù)其功能的不同分為兩種不同類型：

①線性表位(linear)：為小的線狀肽鏈序列,，約為5～20個氨基酸；

②構(gòu)象表位(conformational)：由蛋白折疊而形成的較大的區(qū)域,?？乖?mdash;抗體結(jié)合晶體結(jié)構(gòu)研究表明存在兩種類型的表位。

線性表位的抗體結(jié)合位點與其氨基酸側(cè)鏈骨架之間形成了較強的多樣性結(jié)構(gòu),，并與相鄰的肽鏈序列連接在一起,，這些表位也被稱為連續(xù)性表位。事實上線性表位需要某些局部的結(jié)構(gòu)變形或為緊密的,、但并非連續(xù)的氨基酸序列,，如那些兼性螺旋結(jié)構(gòu)。因此,，所謂線性表位的描述是不夠確切的,。所有與抗體結(jié)合位點功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)，均位于一個肽鏈片段之中,。而來自于該片段之外的其他序列,，對于抗體結(jié)合位點的構(gòu)成并非重要。

構(gòu)象表位宜對較大的蛋白區(qū)表位作圖,。這些表位表現(xiàn)出側(cè)鏈間的相互作用,，雖然在折疊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中構(gòu)象表位彼此非?？拷溟g被較長的線性序列相互隔開,。連續(xù)性表位或接近連續(xù)性的氨基酸序列對蛋白質(zhì)的降解作用有抵抗能力,。而那些非連續(xù)性表位結(jié)構(gòu)在蛋白質(zhì)未能折疊的情況下將會失去活性，這也是兩種不同表位在功能上不同的關(guān)鍵所在,。

在免疫印跡反應中,，抗體能夠識別耐蛋白降解的表位，它們在蛋白抗原上的結(jié)合位點能夠被精確地定位,，直到很小的肽鏈片段,。

構(gòu)象表位的精確定位極為困難。競爭性試驗可用來確定2個或2個以上的抗體是否識別相同的蛋白質(zhì)抗原空間不連續(xù)表位或重疊位點,。大分子蛋白質(zhì)常含有50—100個氨基酸組成的不連續(xù)折疊構(gòu)象,。因此，利用重組DNA技術(shù),，可以定位那些構(gòu)象性表位，至少可以確定其肽鏈片段,。

用途：

檢測免疫反應特異性或不同抗體的鑒別;

用來確定蛋白質(zhì)的特性:如蛋白質(zhì)的位點,、蛋白質(zhì)片段的來源以及蛋白質(zhì)在細胞中的定位。