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產品名稱:巴西果仁PCR檢測試劑盒
產品規(guī)格:50T
注意事項:
1.基礎程序,,擴增溫度和延伸溫度,反應時間,,循環(huán)次數(shù),PCR反應液的配制,,PCR技術的基本原理,,PCR的反應動力學,,PCR擴增產物,,PCR反應體系與反應條件,。
巴西果仁PCR檢測試劑盒
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物,、酶,、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,巴西果仁PCR檢測試劑盒PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度,。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增,。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,,特定條件下可擴增長至10kb的片段,。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴增效果不佳,,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,,否則會形成引物二聚體,,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點,, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,,且可增加引物之間形成二聚體的機會,。
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