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中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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堿性磷酸酶染色
  • 堿性磷酸酶染色

貨物所在地:上海上海市

地: 上海市寶山區(qū)高境鎮(zhèn)

更新時(shí)間:2025-01-22 21:00:25

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堿性磷酸酶(AKP)的顯示方法最早由Gomeri(1939)提出,,現(xiàn)在這種方法稱為Gomeri法。堿性磷酸酶是指磷酸單酯酶
1,它能在DH8.6~10.0的最適條件下分解磷酸單酯,,對(duì)于與硫略相接的醇其沒有特 導(dǎo)性,,Gomeri法是讓該酶在堿性條件
下,分解磷酸鈉,,產(chǎn)生磷酸根,。

1、取材,、 固定,、包埋、切片;

2,、取已粘好烘 干的切片兩塊,,放入二甲苯(一)→二甲苯(二)(各3-4分鐘)的染缸中進(jìn)行脫蠟,再經(jīng)100%乙醇(一)

→100%乙醇(二)→95%乙醇→90%乙醇 →70%乙醇→30%乙醇→水,。每級(jí)各一分鐘,,在移切片時(shí),用鑷子夾住切片震蕩

并提起,,放下反復(fù)幾次,,在移入下一染缸邊緣前稍停留,讓溶液滴凈后,,再入下 一染缸,,以免把上一染缸溶液過多帶入下

一染缸,而影響切片質(zhì)量;

3,、將其中一塊切片以蠟筆作一標(biāo)記(用作對(duì)照組切片),,放入沸水中煮沸5分鐘;

4,、將兩塊切片均放入AKP作用液中孵育30-60分鐘,作用液要事先預(yù)熱到37℃,,水浴中進(jìn)行;

5,、取出切片在蒸餾水中洗滌;

6、放入硝.酸.鈷溶液2-3分鐘;

7,、蒸餾水沖洗干凈,,否則切片易被污染,影響定位;

8,、切片浸入硫化銨中2-3分鐘;

9,、蒸餾水沖洗干凈;

10、經(jīng)各級(jí)酒精脫水,,即30%乙醇→70%乙醇→90%乙醇→950%乙醇→100%乙醇(二)→100%乙醇(一),,各級(jí)一分鐘。


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