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第一天:

1.在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次,，每次3min;

2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min ，PBS浸洗玻片3次,，每次3min,，

3.0.5%Triton X-100室溫通透20min,。

4.PBS浸洗玻片3次，每次3 min,，吸水紙吸干PBS,，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min ;

5.吸水紙吸掉封閉液,，不洗,，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜,，

第二天:

6.加熒光二抗: PBST 浸洗爬片3次,，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,，濕盒中20-37℃孵育1h,，PBST浸洗切片3次，每次3min;注意:從加熒光二抗起,，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行,。

7.復(fù)染核:滴加DAPI避光孵育5min，對標(biāo)本進(jìn)行染核,，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI;

8.用吸水紙吸干爬片上的液體,，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像,。