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一,、服務介紹

 大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關,，其中線粒體跨膜電位（MMP）的下降，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應過程中早發(fā)生的事件之一,。它發(fā)生在細胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮,、DNA斷裂）出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細胞凋亡不可逆轉(zhuǎn),。

二,、實驗原理

 JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑,。JC-1在細胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在,，分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當JC-1 濃度低或膜電位水平低時,，主要以單體形式存在,，激發(fā)波長為527nm,，呈綠色熒光；當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時,，形成聚合物,，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長為590nm,。當細胞發(fā)生凋亡時,，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放,，紅光強度減弱,，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化,。

三,、實驗流程

1. 細胞培養(yǎng),；

2. 用適當?shù)姆椒ㄕT導細胞凋亡,，同時設立陰性依照組合陽性對照組，收集細胞,；

3. 用PBS洗滌細胞三次,，收集不多于1×106的細胞；

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×Incubation Buffer,，混勻并預熱至37℃,；

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1,，渦旋混勻配成JC-1工作液,；

6. 取500 μL JC-1工作液將細胞均勻懸浮，37℃,，5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min,。

7. 室溫離心（2000rpm,5min）收集細胞，用1×Incubation Buffer洗兩次,；

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細胞,；

9. 流式細胞儀檢測，分析,。

四,、客戶提供

細胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細胞)，相關藥品或MMP檢測試劑盒（可代購）!

五,、公司提供

實驗步驟,、結(jié)果圖、數(shù)據(jù)結(jié)果和分析報告

實驗周期：1-2周,，具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內(nèi)容而定,。