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脾單核細胞分離實驗操作方法：

采用頸椎脫臼法處死小鼠,，于75%的酒精中浸泡10-15min；
在無菌超凈臺內(nèi)分離脾臟，放入PBS溶液（按照1：50的比例加入雙抗）中清洗2遍,；
將清洗后的脾臟組織轉移至離心管中,，加入適量的RMPI-1640培養(yǎng)基，用剪刀將其剪碎成糜狀,；
將剪碎后的組織經(jīng)200目的濾網(wǎng)過濾,，得到脾細胞懸液；
另取一個離心管,，先加入與細胞懸液等量體積的淋巴細胞分離液,，之后將細胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細胞分離液上層（注意45度傾斜沿管壁滴加，一定要緩慢否則懸液沉下去導致分層界面不明顯）,；
3000rpm離心10min,，離心完畢后吸取中間白膜層即為脾單個核細胞；
3000rpm離心10min,，加入RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次,；
用紅細胞裂解液去除紅細胞；3000rpm離心10min,，再次用RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次,；
洗滌結束后，所得細胞沉淀用RMPI-1640培養(yǎng)基重懸后進行細胞計數(shù),；