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流式雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
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更新時(shí)間:2025-06-09 21:00:07

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流式雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一,,由細(xì)胞平臺(tái)和分子平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。

凋亡和壞死,,是常見(jiàn)的細(xì)胞死亡的兩種方式,,它們有著截然不同的特征。凋亡是細(xì)胞程序性死亡的主要表現(xiàn)形式,,是一個(gè)主動(dòng)性的生理反應(yīng)機(jī)制,;壞死則是細(xì)胞對(duì)嚴(yán)重?fù)p傷的一種被動(dòng)反應(yīng)和變性過(guò)程。

Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白,參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),。但僅Annexin V被報(bào)道可以調(diào)控一些PKC的活性,。

Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡(jiǎn)稱PS),。磷酯酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),,即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期,,不同類型的細(xì)胞都會(huì)把磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面,,即細(xì)胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會(huì)促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng),。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的Annexin V,,即Annexin V-FITC,,就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡(jiǎn)單而直接地檢測(cè)到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。因此Annexin V是檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo),。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液是一種核酸染料,,它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜,但可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,呈現(xiàn)紅色熒光,。對(duì)于壞死細(xì)胞,由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失,,Annexin V-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi),,與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨酸結(jié)合,從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光,。因此將Annexin-V與PI匹配使用,,就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及壞死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。

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