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實驗步驟
1.石蠟切片免疫組化:

①67°C烘箱烘片2小時,常規(guī)脫蠟至水用pH 7.4的PBS)沖洗E次,。每次3 min ;②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩)沖液中中檔微波處理10 min,，蒸餾水沖洗三E次,。PBS沖洗 E次每次3 min;③)3%H202室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性, PBS)沖洗三次,每次3 min ;④5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉.室溫孵育10 min ,吸去血清后滴加稀釋至適當比例的一抗,。37°C孵育1-2 h或者4°C孵育過夜;⑤PBS沖洗三次每次3 min滴加稀釋至適當比例的帶標記:二抗379C孵育10~30 min，PBS沖洗三次每次3 min ;⑥滴加適當比例稀釋的辣根酶標記物工作液379C孵育10-30 min, PBS沖洗三E次,。每次3 min;⑦顯色劑顯色自來水充分沖洗,，復染細胞核酒精脫水二甲苯透明、中性樹膠封固,。

2冰凍切片免疫組化:
①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機內切片厚度為5~6 um;
②載玻片可不打底裱片后立刻用電吹風吹干;
③染色前需用冷*酮4°c固定10-20 min:
④PBS洗2次,每次5 min;.
⑤)39%H202滅活內源性過氧化物酶20 min,，需遍光處理;
⑥后續(xù)血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似后脫水透明封片進行觀察。