您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng),! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:> 供求商機(jī)> 細(xì)胞樣本W(wǎng)B實(shí)驗(yàn)
貨物所在地:上海上海市
更新時(shí)間:2024-09-24 09:10:40
瀏覽次數(shù):92
在線(xiàn)詢(xún)價(jià)收藏商機(jī)( 聯(lián)系我們,,請(qǐng)說(shuō)明是在 化工儀器網(wǎng) 上看到的信息,謝謝?。?/p>
一個(gè)基因表達(dá)結(jié)果是產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)(或酶),。因此檢測(cè)蛋白質(zhì)是測(cè)定基因表達(dá)的主要標(biāo)志,,檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法很多,除ELISA法外,,也可用與檢測(cè)DNA和RNA相類(lèi)似的吸印方法,。前兩法有“南”和“北”之意,故本法遂被延伸稱(chēng)為Western(西)印跡法,,該法能用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分辨出與專(zhuān)一抗血清結(jié)合的專(zhuān)一性蛋白質(zhì),。將聚丙烯酰胺凝膠上分辨出的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上并與一抗共孵。一抗專(zhuān)一地與待分離蛋自質(zhì)的抗原決定簇結(jié)合,,然后用另一種蛋自質(zhì),,如135I-蛋白A或辣根過(guò)氧化物酶連接的山羊抗IgG檢測(cè)已結(jié)合上去的抗體。本法所需時(shí)間6小時(shí)或過(guò)夜,。 蛋白質(zhì)的聚丙烯酰胺凝膠電泳 幾乎所有蛋白質(zhì)電泳分析都在聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行,,而所用條件總要確保蛋白質(zhì)解離成單個(gè)多肽亞基并盡可能減少其相互間的聚集。常用的方法是將強(qiáng)陰離子去污劑SDS與某一還原劑并用,,并通過(guò)加熱使蛋白質(zhì)解離后再加樣于電泳凝膠上。變性的多肽與SDS結(jié)合并因此而帶負(fù)電荷,,由于多肽結(jié)合SDS的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無(wú)關(guān),,因此SDS多肽復(fù)合物在聚丙烯酰凝膠電泳中的遷移只與多肽的大小相關(guān)。在達(dá)到飽和的狀態(tài)下,,每克多肽約可結(jié)合1.4克去污劑,,借助已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)參照物,則可測(cè)算出多肽鏈的分子量,。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳大多在不連續(xù)緩沖系統(tǒng)中進(jìn)行,,其電泳槽緩沖液的pH值與離子強(qiáng)度不同于配膠緩沖液,當(dāng)兩電極間接通電流后,,凝膠中形成移動(dòng)界面,,并帶動(dòng)加入凝膠的樣品中所含的SDS多肽復(fù)合物向前推進(jìn),。樣品通過(guò)高度多孔性的積層膠后,復(fù)合物在分離膠表面聚集成一條很薄的區(qū)帶(或稱(chēng)積層),。曲于不連續(xù)緩沖系統(tǒng)具有把樣品中的復(fù)合物全部濃縮于極小體積的能力,,故大大提高了SDS聚丙烯酰胺凝膠的分辨率。 廣泛使用的不連續(xù)緩沖系統(tǒng)早是由Ornsstein(1964)和Davis(1964)設(shè)計(jì)的,,樣品和積層膠中含Tris-Cl(pH6.8),,上下槽緩沖液含Tris-甘氨酸(pH8.3),分離膠中含Tris-Cl(pH8.8)的,。系統(tǒng)中所有組分都含有0.1%的SDS(Laemmli, 1970),,樣品和積層膠中的氯離干形成移動(dòng)界面的先導(dǎo)邊界而甘氨酸分子則組成尾隨邊界,在移動(dòng)界面的兩邊界之間是一電導(dǎo)較低而電位滴度較陡的區(qū)域,,它推動(dòng)樣品中的多肽前移并在分離膠前沿積聚,,此處pH值較高,有利于甘氨酸的離子化,,所形成的甘氨酸離子穿過(guò)堆集的多肽并緊隨氯離子之后,,沿分離膠泳動(dòng)。從移動(dòng)界面中解脫后,,SDS多肽復(fù)合物成一電位和pH值均勻的區(qū)帶泳動(dòng)穿過(guò)分離膠,,并被篩分而依各自的大小得到分離。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,,信息內(nèi)容的真實(shí)性,、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任,。
溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn),,建議您在購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。