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脾單核細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)操作方法：

采用頸椎脫臼法處死小鼠,，于75%的酒精中浸泡10-15min；
在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)分離脾臟,，放入PBS溶液（按照1：50的比例加入雙抗）中清洗2遍,；
將清洗后的脾臟組織轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的RMPI-1640培養(yǎng)基,，用剪刀將其剪碎成糜狀,；
將剪碎后的組織經(jīng)200目的濾網(wǎng)過(guò)濾，得到脾細(xì)胞懸液,；
另取一個(gè)離心管,，先加入與細(xì)胞懸液等量體積的淋巴細(xì)胞分離液，之后將細(xì)胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細(xì)胞分離液上層（注意45度傾斜沿管壁滴加,，一定要緩慢否則懸液沉下去導(dǎo)致分層界面不明顯）,；
3000rpm離心10min，離心完畢后吸取中間白膜層即為脾單個(gè)核細(xì)胞；
3000rpm離心10min,，加入RMPI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌一次,；
用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞；3000rpm離心10min,，再次用RMPI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌一次,；
洗滌結(jié)束后，所得細(xì)胞沉淀用RMPI-1640培養(yǎng)基重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),；