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凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)是 一種研究DNA 結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA 結(jié)合序列相互作用的技術(shù),,可用于定性和定 量分析,。
這一技術(shù)初用于研究DNA結(jié)合蛋白,目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特 定的 RNA 序列的相互作用,。 通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的 DNA或RNA探針一同保溫,,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的 探針。DNA復(fù)合物或RNA復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢,。同位素標(biāo)記的探針依研 究的結(jié)合蛋白的不同,, 可是雙鏈或者是單鏈。 當(dāng)檢測 如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA 結(jié)合 蛋白,,可用純化蛋白,,部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液,。在檢測RNA結(jié)合蛋白時(shí),,依 據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提 液,。 競爭實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA 或RNA 的片段和寡核苷酸片段 (特異) 和, 其它非相關(guān)的片段(非特異) ,,來確定DNA 或RNA 結(jié)合蛋白的特異性,。在競爭的特異 和非特異片段的存在下,依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來確定特異結(jié)合,。
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