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大鼠超敏C反應(yīng)蛋白ELISA實(shí)驗(yàn)客戶需提供大鼠血清、血漿,、組織及相關(guān)液體樣本,，或者由我司直接取材。

大鼠超敏C反應(yīng)蛋白ELISA實(shí)驗(yàn)原理和操作步驟：

 應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)水平,。用純化的
大鼠超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次
加入超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)，再與 HRP 標(biāo)記的 hs-CRP 抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)
抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并
在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的超敏 C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP)呈正相
關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠超敏 C
反應(yīng)蛋白（hs-CRP)濃度,。

 
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在孔一,、孔二中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,，然后在孔一,、孔二中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻；然后從孔一,、孔二中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl,，濃度分別為 6μg/L,，4μg/L ，2μg/L,，1μg/L,， 0.5μg/L）,。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4.配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 5 次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3,。
8.洗滌：操作同 5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。