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大鼠腦鈉素ELISA實驗
  • 大鼠腦鈉素ELISA實驗

貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-12-26 21:00:07

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( 聯(lián)系我們,,請說明是在 化工儀器網(wǎng) 上看到的信息,,謝謝?。?/p>

大鼠腦鈉素ELISA實驗是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項目之一,,由專業(yè)的技術(shù)人員操作完成,。

大鼠腦鈉素ELISA實驗需客戶提供大鼠組織、血漿,、血清及相關(guān)的液體樣本,。

大鼠腦鈉素ELISA實驗操作原理:

 應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠腦素(BNP)水平。用純化的大鼠腦鈉素(BNP)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入腦鈉素(BNP),再與 HRP 標(biāo)記的腦鈉素(BNP)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的腦鈉素(BNP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠腦鈉素(BNP)濃度,。

樣本要求:

 1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合 10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程2中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的 PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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