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ALT生化檢測實驗服務原理:
丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT),,又稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT),,在37C、 pH7. 4的條件下,,可催化基質(zhì)(底物)液中的丙氨酸與a-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:生成的丙酮酸可與起終止和顯色作用的2, 4二硝基苯肼發(fā)生加成反
應,生成丙酮酸-2, 4-二硝基苯腙,,進而在堿性環(huán)境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物,,其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與丙酮酸的生成量,亦即與ALT活性的高低成正比關系,。據(jù)此與同樣處理的丙酮酸標準液相比較,,便可算出或通過標準曲線查出血清中ALT的活性.
ALT生化檢測實驗服務注意事項:
1、比色法中常用的有賴氏(Rei tman-Franke1)法及金氏(King)法,。賴氏法標準曲線所定單位數(shù),,是用實驗方法和卡門氏分光光度法(速率法)作對比測定求得的。以卡門氏單位報告結(jié)果,,比較準確,。卡門氏單位定義為: 1ml血清,,反應液總?cè)萘?ml,,波長340nm,1cm光徑,25"C,, 1min內(nèi) 所生成的丙酮酸,,使NADH氧化成NAD* 而引起吸光度每下降0. 001為一個單位(1卡門氏單位=0.482 IU/L,25C),。
2,、一般血清標本內(nèi)源性丙酮酸很少,個體相差也不大,,作大批標本測定時,,不需每份標本都作對照管,嚴重脂血,、黃疽,、溶血及陳舊血清須作自身對照管。建議對活力單位超過正常尤其是在臨界時,進行復測:復測時每份標本均作對照管,。
3,、酶活力超過150單位時,用鹽水稀釋血清后重測,。
4,、應將一般血清的對照管(或稱標本空白管)的吸光度作為日常質(zhì)控的指標之一;如相差大,可考慮a-酮戊二酸濃度,、DNPH濃度及儀器等原因引起,。
5、血清中ALT在室溫(25"C) 可保存2天,,在4C可保存-周,,在-25"C可保存1個月。
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