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EMSA組學(xué)技術(shù)服務(wù)
凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)和DNA序列相結(jié)合的技術(shù),,初用于研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用,可用于定性和定量分析,。分為2種類型:同位素標(biāo)記探針,,非同位素標(biāo)記探針,。
通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針,。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢,。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,,可是雙鏈或者是單鏈,。當(dāng)檢測(cè)如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白,,可用純化蛋白,,部分純化蛋白,,或核細(xì)胞抽提液,。在檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白時(shí),,依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA或RNA和寡核苷酸序列(特異),,和其它非相關(guān)的序列(非特異),,來(lái)確定DNA或RNA結(jié)合蛋白的特異性,。在競(jìng)爭(zhēng)的特異和非特異序列的存在下,,依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來(lái)確定特異結(jié)合。
EMSA組學(xué)技術(shù)服務(wù)步驟:探針的標(biāo)記,,探針的純化,EMSA膠的配制,,EMSA的結(jié)合反應(yīng),,探針冷競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),,突變探針冷競(jìng)爭(zhēng),,super-shift 反應(yīng),電泳,。
內(nèi)容:包含電子版掃膜結(jié)果及灰度值分析,,每張膜可做1-7個(gè)樣本。
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